改良碱裂解法和煮沸法提取金黄色葡萄球菌DNA效果的比较-江苏大学.pdf

第２８卷第３期 江 苏 大 学 学 报（医学 版） Ｖｏｌ．２８ Ｎｏ．３ 　 ２０１８年５月 　 ＪｏｕｒｎａｌｏｆＪｉａｎｇｓｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（ＭｅｄｉｃｉｎｅＥｄｉｔｉｏｎ） Ｍａｙ２０１８ 　 　 　 　 　 　 改良碱裂解法和煮沸法提取金黄色葡萄球菌 ＤＮＡ效果的比较 １ １ １ １ １ 邹治情 ，王俊玲 ，陈思 ，谢雨 ，ＤｉｎｓｈＫｕｍａｒＫ， 吴亮１， １ ２ １ １ ，姜旭淦 ，阴晴 ，陈盛霞 ，许化溪 （１．江苏大学医学院，江苏 镇江２１２０１３；２．江苏大学附属医院检验科，江苏 镇江２１２００１） ［摘要］　目的：建立一种简便经济的金黄色葡萄球菌基因组ＤＮＡ提取方法。方法：选取１０株耐甲氧西林的金黄 色葡萄球菌，预先以终浓度２ｍｇ／ｍＬ溶菌酶处理６ｈ，再以改良碱裂解法提取细菌基因组ＤＮＡ。同时以常规煮沸法 制备上述细菌基因组ＤＮＡ。采用ＰＣＲ法扩增两种模板中金黄色葡萄球菌ｓｐａ基因、ｍｅｃＡ基因和ｆｅｍＢ基因，比较两 种方法提取ＤＮＡ的效果。结果：以改良碱裂解法制备ＤＮＡ为模板，所有１０株标本均可扩增出ｓｐａ基因和ｍｅｃＡ基 因，４个标本扩增出ｆｅｍＢ基因；以直接煮沸法制备ＤＮＡ为模板，仅 １个标本扩增出ｓｐａ基因，２个标本扩增出ｍｅｃＡ 基因，所有标本未扩增出ｆｅｍＢ基因。结论：改良碱裂解法提取基因组 ＤＮＡ效果优于直接煮沸法，所提取基因组 ＤＮＡ可以满足ＰＣＲ扩增的要求。 ［关键词］　金黄色葡萄球菌；ＰＣＲ检测；标本处理；ＤＮＡ提取 ［中图分类号］　Ｒ３７８．１１　　［文献标志码］　Ｂ　　［文章编号］　１６７１－７７８３（２０１８）０３－０２６７－０４ ＤＯＩ：１０．１３３１２／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７１７７８３．ｙ１８０００７ ［引用格式］邹治情，王俊玲，陈思，等．改良碱裂解法和煮沸法提取金黄色葡萄球菌ＤＮＡ效果的比较［Ｊ］．江苏大 学学报（医学版），２０１８，２８（３）： ２６７－２７０． 　　金黄色葡萄球菌是临床常见的革兰阳性菌，可 低，无法用于ＰＣＲ扩增。本研究中我们参考植物细 产生多种毒力因子，引起感染者食物中毒、假膜性肠 胞基因组ＤＮＡ碱裂解提取法并加以改进，建立了一 炎、烫伤样皮肤综合征、毒素休克综合征、化脓性炎 种简单、经济、有效的提取方法，现报告如下。 症和败血症等，给患者造成极大损害［１］。近年来随 １　材料和方法 着抗生素的广泛应用，金黄色葡萄球菌耐药现象日 益严重，临床耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌（ｍｅｔｈｉ １．１　菌种 ｃｉｌｌｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｔＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓ，ＭＲＳＡ）分离率 １０株金黄色葡萄球菌株由江苏大学附属医院 逐年提升。目前金黄色葡萄球菌的分离鉴定和耐药 检验科微生物室鉴定分离，均经 ＶＩＴＥＫ Ｃｏｍｐａｃｔ Ⅱ 性分析需要５～７ｄ，方法烦琐且耗时耗力，不能满足 全自动细菌鉴定仪（法国生物梅里埃公司）鉴定为 临床诊断需求。ＰＣＲ法等分子生物学技术是目前 ＭＲＳＡ菌。所有细菌均先涂布于血琼脂培养基活 公认最具发展前景的细菌鉴定和耐药性分析技术， 化，再挑取单个菌落接种于水解酪蛋白培养基 具有高灵敏度、高特异性及操作简便迅速等优 （ＭｕｅｌｌｅｒＨｉｎｔｏｎ，