第11章基因工程与体外表达.pptVIP

α 互补的检测 目 录 2、免疫学方法 利用特异性抗体检测表达产物 3、核酸杂交法筛选特定DNA 鸡的β肌球蛋白的克隆和免疫学检测方法 目 录 原位杂交 目 录 Southern印迹 目 录 4、PCR技术对特定DNA进行直接鉴定 5、利用限制性内切酶酶切图谱鉴定DNA hMLCK重组质粒酶切图谱分析 1．未酶切质粒 2. EcoRⅠ酶切 3. Hind Ⅲ 酶切 4．EcoRⅠ/Hind Ⅲ双酶切 5. 250bpDNA Ladder 1、利用TK-细胞突变株进行筛选 转染细胞的抗性标记筛选 TK-细胞 TK+细胞 HAT培养液 不能存活 能存活 A：氨基蝶呤是核苷酸从头合成的抑制物， H：次黄嘌呤可以作为补救合成dATP、dCTP 的底物 T：胸苷它必需在TK（胸苷激酶）作用下生成胸苷一磷酸。 2、药物筛选：新霉素抗性基因 G418是一种氨基糖苷类抗生素 ,它的结构和新霉素、庆大霉素、卡那霉素相似，它干扰核糖体功能而阻断蛋白质合成,对原核和真核等细胞产生毒素 。当neo基因（新霉素抗性基因）被整合进真核细胞DNA后 , 获得抗性产物氨基糖苷磷酸转移酶,使细胞获得抗性而能在含有Ｇ418的选择性培养基中生长。 第五节 利用重组DNA技术可对 基因进行改造 基因定点诱变 指将基因的某一个或某些位点进行人工