变性梯度凝胶电泳
变性梯度凝胶电泳(DGGE)是一种根据DNA片段的熔解性质而使之分离的凝胶系统。核酸的双螺旋结构在一定条件下可以解链,称之为变性。核酸50%发生变性时的温度称为熔解温度(Tm)。Tm值主要取决于DNA分子中GC含量的多少。DGGE将凝胶设置在双重变性条件下:温度50~60 ℃
详细
实验方法
变性梯度凝胶电泳(DGGE)
实验材料
DNA样品
试剂、试剂盒
尿素
去离子甲酰胺
丙烯酰胺
甲叉双丙烯酰胺
琼脂糖?
仪器、耗材
PCR扩增仪
变性梯度凝胶电泳仪
凝胶成像及分析系统
紫外透射仪
高速离心机
电泳仪
电泳槽
微量加样器
Tip头
Tip头盒
Eppendorf管
Eppendorf管架
一、实验原理
变性梯度凝胶电泳(DGGE)是一种根据DNA片段的熔解性质而使之分离的凝胶系统。核酸的双螺旋结构在一定条件下可以解链,称之为变性。核酸50%发生变性时的温度称为熔解温度(Tm)。Tm值主要取决于DNA分子中GC含量的多少。DGGE将凝胶设置在双重变性条件下:温度50~60 ℃
为了提高DGGE的突变检出率,可以人为地加入一个高熔点区——GC夹。GC夹(GC clamp)就是在一侧引物的5′端加上一个30~40bp的GC结构,这样在PCR产物
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