WHO《人类精液分析》201203-9讲课.ppt

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一、WHO第五版《人类精液分析 实验室手册》新技术、新观点学习 二、精子库质控 精子库:龙兴宇 修订背景 以往精液分析存在问题: 检测方法不一 结果带有主观性、不客观、不真实 精确度低、重复性差 对男性生育力的评估、临床诊断参考价值很有限 因此,需要一个标准化的手册 第五版修订的新特点 推荐采用称重精液质量推测精液体积的方法 使用相差显微镜phase-contrast观察活精子 一些重要的精子形态参数的变化 增加了关于精子冷冻保存的新章节。 一些精液术语(无精症,弱畸精子等)精确定义 精子活力的评估。第五版与先前版本的主要不同在于对精子活力的分级。目前推荐精子活力被分为前向运动PR、非前向运动NR的不动精子IM(而不再分为a, b, c和d级) 总活力(PR+NP),即前向运动(PR),非前向运动(NP)及非运动精子(IM)需在室温或37℃下计量。 第五版本WHO《人类精液检验和处理手册》数据来源、调查方法的特点: 1.?参考人群进行精确定义,参考值的数据,纳入的参考人 群范围广,文献收集更全,多中心,包括前瞻性和回顾性 研究,四大洲,14个国家的4500名男性 ,更具代表 性, 2.??收集了各国新父亲提供的妊娠所需时间( time-to- pregnancy ,TTP)的数据 3.??检测方法尽量采用了标准化方法,具备可比性 称重法推测精液体积---计算每次射精总数 每次射精精子总数是评价睾丸生精功能和输精管道的通畅情况的重要指标。 每次射精精子总数=精子浓度×体积,精子浓度通过计数板测量,体积则需要通过称重法或者量筒法测量。 精液体积WHO第四版推荐使用的是量筒法,即通过将精液倒入有刻度的量筒或者滴管,读取刻度上的体积数。 精液体积WHO第五版推荐使用的是称重法, 即通过获取精液重量,除以精液密度,从而获得精液体积。然后精子密度×精液体积得到每次射精总的精子数目。 先给洁净的一次性取精杯称重; 用取精杯收集精液样本, 给盛有精液的取精杯一同称重; 总重量减去取精杯的重量; 根据公式 重量÷精液密度=体积 通常精液密度为1 g/ml ,精液密度在 1.043 和 1.102 g/ml 之间(Huggins 等, 1942; Brazil 等, 2004a; Cooper 等, 2007)。 每次射精精子总数=精子浓度×体积 (注:由于生产批次的问题,每个取精杯可能具有不同的重量,所以应该提前分别称重。用标记笔在容器上标明其重量。) 相差显微镜优势 相差显微镜是一种将光线通过透明标本细节时所产生的光程差(即相位差)转化为光强差的特种显微镜。 相差显微镜可能减少光透光度,适当防止活力和形态不准确地测量 用普通光学显微镜观察未经染色的标本(如活的细胞)时,其形态和内部结构往往难以分辨。 正常形态精子 形态异常精子 畸形精子:头部畸形、中段偏厚、双尾 畸形精子:头部畸形、中段畸形 畸形精子:梨形头、中段弯曲、不规则、胞浆小滴过多 畸形精子:头部畸形 畸形精子:梨形头 畸形精子:头部畸形 畸形精子:头部畸形、中段偏厚 畸形精子:头部畸形、空泡数2 畸形精子:头部正常、顶体70% 畸形精子:头部畸形、顶体70% 畸形精子:头部畸形、顶体40% 畸形精子:头部畸形、顶体40% 异常精子:头部畸形、胞浆小滴过多 异常精子:头部正常、中段弯曲、尾部正常 异常精子:头部异常、顶体70%,尾部弯曲 畸形精子:头部异常、中段弯曲、非对称性插入、尾部卷曲 畸形精子:头部正常、中段偏厚、尾部弯曲 畸形精子:头部正常、中段弯曲、尾部正常 精液分析的质量控制 质控基本原理 误差:测定值和真值之差。 随机误差和系统误差 SOP的制定 室内质控,室间质控 质控品的使用 精液分析的常见系统误差 ①方法误差: ②操作误差: ③仪器与试剂引起的误差: 质控图 失控的原因 样本混匀不充分 检测人员紧张 技术不精 培训不充分 仪器的问题 质控样本变质 设备尤其是加样器或计数池的更换 操作程序或实验室环境改变 精子计数总量与抽样误差关系 两次计数均数之差可以接受的差异范围 两次计数百分率之差可以接受的差异范围 例如:重复测定400个精子,当平均百分率为20%时,两次之间的差异应该 8%,当平均百分率为5%时,差异应 5%。 如果实际差异超过了此标准,应另外制备2份新鲜样本并重新评估精子活力。 温度(室温和排精室20~25 ℃,排精室25℃,冰箱4 ℃ /-18 ℃ ,水浴箱37 ℃ 、培养箱37 ℃ ,液氮罐-19

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