东方百合AFLP分子标记技术体系的建立.docVIP

东方百合AFLP分子标记技术体系的建立 摘要: 本研究以索蚌（Sorbonne）、康斯坦撒（Constantza）及其杂交F1代为材料构建了东方百合扩增片段长度多态性 (AFLP)分析体系.采用改进的 CTAB方法, 从东方百合中提取基因组 DNA, 琼脂糖凝胶电泳主带清晰、DNA 纯度高、较少降解、不含酶反应抑制剂, 可被 M se 和 Pst 两种限制性内切酶完全酶切。通过酶切连接、预扩增、选择性扩增、银染等试验过程, 成功建立了东方百合 AFLP 反应体系, 得到了清晰的指纹图谱, 试验结果重复性好. 关键词：东方百合；AFLP；DNA提取 Establishment of AFLP molecule labeling technique system of Oriental Hybrids Abstract In this paper，we used Sorbonne，Constantza and Its F1 hybrids as materials. AFLP ( amplified fragment length polymorphism ) analysis system for Oriental Hybrids was established in this study.The improved method of CTAB-DNA isolation was used to extract genome DNA from Oriental Hybrids. High quality genome DNA was obtained. Strips in agarose electrophoresis were clear and less decomposed. These DNA samples with high purification were intact without containing inhibitor of enzyme reaction and could be completely digested by restriction enzymes such as Mse and Pst inter sweet cultivars. The system suitable for silver stained AFLP analysis were established successfully by processes like restriction enzymes digesting ligating reaction, amplification reaction, and selective amplification. Sharp fingerprintings were obtained by these processes, and the reproducibility was high. Key words:Oriental Hybrids; AFLP; DNA isolation 东方百合学名“Oriental Hybrids”?，是由天香百合、鹿子百合、日本百合、红花百合与湖北百合的杂交获得的栽培杂种系。因其花形大、花色艳丽、姿态高雅、香味浓郁备，深受市场欢迎，逐渐取代亚洲百合，成为最重要的百合组。荷兰和美国成为世界百合的培育中心，已培育出数以千计的品种，几乎垄断了国际百合种球市场。我国有着丰富的野生百合资源，全世界百合约有97个种，而起源于我国的就有47个种和18个变种，约占世界百合属植物的一半，其中有36个种和15个变种为中国特有种。但是缺少拥有自主知识产权的优良百合品种，种球几乎完全依赖进口，而进口的种球种性退化快，严重制约着我国百合产业化的发展。. 随着分子生物学的发展, 出现了多种分子标记技术, 使从基因组水平探讨东方百合遗传变异成为可能. 扩增片段长度多态性(Amplified fragment length polymorphism , AFLP)是1992年由荷兰Keygene公司Zabeau和Vo s在PCR和RFL P的基础上发展起来的新一代分子标记技术[1].它既克服了RFL P技术复杂, RA PD稳定性差、标记呈显性遗传的缺点,同时又兼有二者之长,具有分辨率高、稳定性好、高效率和高灵敏度等优点,实验结果稳定可靠[2,3]. A FL P产生丰富而稳定的遗传标记,可以用于遗传多样性、基因追踪、基因定位、分类、系统发育、品种鉴别、遗传图谱构建等各个领域[4].目前A FL P技术在植物中的应用非常广泛,除了在小麦、水稻、玉米、大豆、花生等农作物中