关于液相梯度洗脱的几点思考.docxVIP

梯度洗脱 对于组分复杂的样品，采用一种色谱体系，很难得到理想的分离结果。要么分离时间太长，要么分离度太差。 液相色谱 中采用梯度洗脱 ,目的：缩短的时间；提高分离效果。 梯度洗脱： 流动相由几种不同极性的溶剂组成， 通过改变流动相中各溶剂组成的比例改变流动相的极性， 使每个流出的组分都有合适的容量因子 k ，并使样品种的所有组分可在最短时间内实现最佳分离。 梯度洗脱特点： 提高柱效 改善检测器的灵敏度 当样品中的一个峰的 k 值和最后一个峰的 k 值相差几十倍至几百倍时， 别好。 梯度洗脱中为保证流速的稳定，必须使用 恒流泵 ，否则难获重复结果。 梯度洗脱常用一个弱极性的溶剂 A 和一个强极性的溶剂 B 。  使用梯度洗脱效果特 梯度范围：指流动相中强溶剂分别在起始液和终止液中的浓度。 调节梯度范围对得到最佳的梯度分离起重要作用。 最佳梯度范围：第一个峰处分时间大约为 2 倍的 t0，梯度结束时把最后一个峰洗脱出来。 梯度洗脱的形式 线形梯度： 在梯度洗脱时， 流动相强度的变化梯度时间成线性比例。 在一定时间内流动相强 度越大，直线斜率越大。 指数梯度：在梯度洗脱时，流动相强度岁梯度时间变化称指数关系 。 凹形：梯度起始阶段强度变化缓慢，随时间增加强度变化加快。 凸形：起始阶段梯度速度变化快，终止阶段梯度速度变化慢。 折线形： 选择适当的 A,B 溶剂 强度： A 溶剂为低强度