实验 Y 果蝇遗传标记分析-PAPD演示课件.pptVIP

四、实验材料-步骤 : （1）D.Virilis ------------10只 （2）黑腹果蝇--P♀、P♂、 F1♀、F1♂、 F2♀、F2♂各40只 （3）其他材料 -- 0.2g 1份（7种果蝇样品+1种其他）/小组 （1）、（2）的P、（3）由教师提供，（2）F1、F2用自己存的材料。 已经制备匀浆液 ,一半已经用于同工酶实验 * fhfh ?制备DNA粗提液： 每份材料（普通果蝇40只、大果蝇10只、或其他材料0.2g） +400μL匀浆缓冲液匀浆 匀浆液200μL 匀浆液200μL 用于RAPD实验提取DNA （冰浴操作） 液体倒入1.5ml离心管 +22μL SDS、2μL的蛋白酶K 翻转混匀（动作要轻）→55℃水浴 2h →存-20℃ 用于同工酶实验 已完成 第一周做到此步 * fhfh 一周后的实验课及课余时间: -20℃中取出的样品 +RNA酶至200μg/mL，37℃ 0.5~1h 等V酚/氯仿/异戊醇（25﹕24﹕1）抽提 (慢慢旋转混匀，倾斜使两相接触面增大 ) 冰浴10min 4℃ 12000rpm 离心5min 1.5ml新EP 上清（水相）至 等V氯仿/异戊醇（24﹕1），轻混匀 冰浴10min 4℃ 12000rpm ，5min 1.5ml新EP 上清（水相）至 等V异丙醇，轻轻混匀 白色线团状