第八章食品中致病菌和病毒--精品课件知识课件.pptVIP

② PCR法 根据弯曲菌属16sRNA高保守序列设计一对引物；在合适的反应条件和反应体系下进行反应；最后利用电泳观察结果。 ③ 荧光酶标试剂盒 检测弯曲杆菌的探针是用非放射性物质标记的。标记物为发光素。靶顺序为rRNA。近年来用碱性磷酸酶人工合成的寡核苷酸检测人工污染的粪便样品，检测量为一百万个菌落形成单位（CFU)，敏感性和特异性达100％。 此方法只在临床检测中应用，尚未用于食品检测。 8.4 金黄色葡萄球菌 葡萄球菌是一类革兰氏阳性菌。它的致病力的强弱与其产生的毒素及酶类有关。人一旦感染该菌，当机体抵抗力减弱或皮肤受损时，易被感染，引起伤口化脓、中耳炎、毛囊炎等。产生葡萄球菌肠毒素的还可引起食物中毒。 对人有致病性的葡萄球菌多产生α-溶血素；对动物有致病性的葡萄球菌多产生β-溶血毒素。 金黄色葡萄球菌某些菌株能产生一种能引起急性肠胃炎的肠毒素，当这些菌株污染了食物，在温度条件适宜时，即可产生相当数量的肠毒素，根据肠毒素的血清型别不同，分为A、B、C、D、E五型。其中以A型引起的食物中毒最多，B和C型次之。肠毒素是一种可溶性蛋白质纯化的肠毒素，能耐高温。 血浆凝固酶是鉴别葡萄球菌有无致病性的重要指标。血浆凝固酶具有抗原性，可分为8型。大多数致病性葡萄球菌能产生此酶，而非致病菌不产生。可应用8个型的凝固酶抗血清进行分型试验，用来研究葡萄球菌的流行病学情况。 检验方法 （1）常规检验方法 （2）现代检验技术 ① 利用mini－Vidas全自动免疫分析仪，它是应用酶联免疫技术，用荧光分析技术通过固相吸附器，用已知抗体来捕捉目标生物体，然后以带荧光的酶联抗体再次结合，经充分冲洗，通过激发光源检测，即能自动读出发光的阳性标本，其优点是检测灵敏度高、速度快，可在48h的时间内快速筛选鉴定出金黄色葡萄球菌及金黄色葡萄球菌肠毒素。 ② 美国3M公司，利用耐热核酸酶特性，设计出纸片法，能在24h快速检测出金黄色葡萄球菌。 ③ 大多数检测葡萄球菌的探针是针对肠毒素的。它们能同编码肠毒素有关的基因序列杂交，这类探针能检测肠毒素A、B、C和E。 ④ PCR法：设计特异性引物根据产生肠毒素A-E基因（entA, entB, entC, entD和entE),检测葡萄球菌exfoliative基因，检测中毒休克毒素基因(tst)。 8.5 肉毒梭菌 肉毒梭菌是严重食物中毒的病原菌之一，在厌氧的环境下能产生强烈的外毒素。这种毒素毒性强烈，是一种独特的神经麻痹毒素，即肉毒毒素。该毒素性质稳定，是目前已知化学毒物和生物毒素中毒性最强烈者，对人的致死剂量为0. 1ug。 肉毒梭菌在自然界的分布具有某种区域性差异，显示出生态上的差异倾向。根据抗原特异性，可分为A、B、C、D、E、F、G七个型别。 肉毒梭菌一年四季均可发生，发病主要与饮食习惯有密切的关系。 欧美国家：肉类食品、罐头食品； 日本等沿海国家：进食水产品； 我国内地：进食发酵食品（如臭豆腐、豆瓣酱、豆豉等）。 检验方法 1）常规肉毒梭菌的检出 GB/T 4789.12-2003 2）PCR法 报告（一）：检样含某型肉毒毒素 报告（二）：检样含某型肉毒梭菌 报告（三）：由样品分离的菌株为某型肉毒梭菌 8.6 致病性弧菌 弧菌属共有37个种（变种），其中已明确又12个种对人类有致病作用。在这12种致病菌种，最重要的，也是问题最多的是O1型霍乱弧菌、非O1型霍乱弧菌、副溶血性弧菌和创伤弧菌。 霍乱弧菌(Vibrionaceae cholerae) 霍乱弧菌是由O1血清群和O139血清群引起的烈性消化道传染病。该病传播快, 波及面广，是属于国际检疫的传染病。 水是传播霍乱的主要媒介。 与霍乱有关的食品主要是海产品、有壳的水生动物和甲壳动物，主要有鱼、虾、贝类、甲鱼、牛蛙、蟹等。 霍乱弧菌引起的疾病叫霍乱。 由霍乱弧菌E1 Tor生物型引起的症状较轻，病程也短。 霍乱弧菌肠毒素会引起机体严重的呕吐、腹泻等临床症状。 霍乱弧菌的检测方法 生物学检测方法，作霍乱弧菌O1+O139多价血清凝集试验（水、食品）。 PCR（对毒力基因ctxAB、tcpA进行扩增）。 致病性弧菌的检测方法 1、具有代表性检验方法简介 （1） FDA的细菌学分析手册 　霍乱、付弧、创伤弧菌和其他弧菌（1995 1998修订）分别着重介绍了霍乱弧菌、副溶血弧菌、创伤弧菌的方法。 　用PCR方法检测产肠毒素的霍乱弧菌叙述了霍乱肠毒素cholera Toxin (T)基因 （2） AOAC官方分析方法 　　牡蛎中的霍乱弧菌：升温富集法（1995.a） 　　创伤弧菌的脂肪酸气相色谱鉴定法AOAC.(1995.b） 　　美国midi公司生产的shelock微生物鉴定系统。 （3） ISO方法 　　副溶血弧菌的检