CRISPR基因编辑技术课件.ppt

CRISPR基因编辑技术;自从证明DNA是遗传物质以后，人类就开始了通过改变DNA来改造生物体生理机理和功能的尝试。;基因突变技术：物理诱变、化学诱变… 转基因技术：T-DNA插入 RNA干扰技术：dsRNA、Artificial miRNA 核外遗传技术：质粒、人工染色体 同源重组技术：e.g. 传统的基因敲除小鼠 ;基因组编辑技术;历史 1993年前ZFN就已开始出现，迄今已发展了20多年才有今天的成就； 2009年底出现的TALEN似乎一夜之间呈现出取代ZFN的架势； 2012年底CRISPR/Cas已显现出取代TALEN的巨大潜力，在2013年成为现实。 荣誉 2011年：ZFN， TALEN和Meganuclease—2011年度方法（Nature Methods） 2012年：TALEN — 2012年十大突破（Science） 2013年：CRISPR/Cas被认为是诺贝尔奖级别的成果，华人科学家张峰已因此获得生物医学大奖。;基因编辑的三大利器;*;*;ZFN技术的缺陷;TALEN;TALEN原理;全长为34aa的Tal 蛋白的第12、13位氨基残基可以特异性识别核苷酸碱基。 NG可以识别T HD可以识别C NI可以识别A NN可以识别G或A 通过这种特异性识别，将多个Tal蛋白组装在一起，就可以构成可以识别目的片段的Tale蛋白。;TALEN的特异性打靶的原理： 一对可以特异性识别靶基因的TALE，定位到需要编辑的基因组区域； 然后非特异性核酸内切酶FokI切断双链DNA从而造成DNA双链断裂（double-strand break，DSB）； 再通过DNA的自我修复，引起碱基的缺失或突变，从而引起基因突变。 FokI只有在形成二聚体的时候才有内切酶活性。 ;;TALEN的技术特点;CRISPR/Cas 9 背景; CRISPR-Cas系统简介;由这些序列和基因组成的系统我们称之为CRISPR/Cas系统，而在这个系统中常用到的核酸内切酶为Cas9,所以通常称该系统CRISPR/Cas9 系统。利用这个系统，细菌可以不动声色地把病毒基因从自己的染色体上切除，这是细菌特有的免疫系统。;CRISPR/Cas 9概述; CRISPR-Cas系统的结构;CRISPR/Cas系统的基本结构;CRISPR的转录与加工 ;CRISPR/Cas 9作用机理;CRISPR/Cas 9作用机理;CRISPR/Cas 9系统靶向要求;CRISPR/Cas 9基因编辑实验流程图;CRISPR/Cas 9的技术应用;近日，中国科学家利用基因编辑技术——CRISPR/Cas9，对抑制狗骨骼肌生长的基因（MSTN）进行了敲除，培育出两只肌肉发达的“大力神”狗，成功构建??世界首个基因敲除狗模型。;三大基因修饰技术比较;CRISPR/Cas 9系统的优势;CRISPR/Cas 9系统的评价;参考文献： [1] Y. Ishino, H. Shinagawa, K. Makino, M. Amemura, A. Nakata, Nucleotide sequence of the iap gene, responsible for alkaline phosphatase isozyme conversion in Escherichia coli, and identification of the gene product. Journal of bacteriology 169, 5429-5433 (1987). [2] R. Jansen, J. D. A. v. Embden, W. Gaastra, L. M. Schouls, Identification of genes that are associated with DNA repeats in prokaryotes. Molecular microbiology 43, 1565-1575 (2002). [3]方锐,畅飞,孙照霖,李宁,孟庆勇. CRISPR/Cas9介导的基因组定点编辑技术[J]. 生物化学与生物物理进展,2013,08:691-702. [4]李君,张毅,陈坤玲,单奇伟,王延鹏,梁振,高彩霞. CRISPR/Cas系统:RNA靶向的基因组定向编辑新技术[J]. 遗传,2013,11:1265-1273. [5]沈彬. 利用CRISPR/Cas9进行基因编辑[D].南京大学,2014.