5 分子生物学研究方法(上)——DNA、RNA及蛋白质操作技术.pdf

第五章 基因操作主要包括DNA 分 分子生物学基本研究法 子的切割与连接、核酸分子杂 交、凝胶电泳、细胞转化、核酸 从20世纪中叶开始，分子生 序列分析以及基因人工合成、定 物学研究得到高速发展，主要原 点突变和PCR扩增等，是分子生 因之一是研究方法，特别是基因 物学研究的核心技术。 操作和基因工程技术的进步。 基因工程是指在体外将核酸 基因工程技术是核酸操作技术的 分子插入病毒、质粒或其它载体 一部分，只不过它强调了外源核酸分 子在另一种不同的寄主细胞中的繁衍 分子，构成遗传物质的新组合， 与性状表达。 使之进入原先没有这类分子的寄 主细胞内并进行持续稳定的繁殖 事实上，这种跨越物种屏障、把 和表达。 来自其它生物的基因置于新的寄主生 物细胞之中的能力，是基因工程技术 区别于其它技术的根本特征。 5. 1 重组DNA 技术发展史上的重大事件 DNA操作技术 三大成就： 基因克隆的常用载体系统 一、在20世纪40 年代确定了遗传信息的 携带者、即基因的分子载体是DNA 而不是 基因的分离与鉴定。 蛋白质，解决了遗传的物质基础问题； 二、50 年代提出了DNA 分子的双螺旋结构 模型和半保留复制机制,解决了基因的自 我复制和世代交替问题； 1 表5-1 重组DNA 技术史上的主要事件 年 份 事 件 三、50 年代末至60 年代，相继提出了“ 中 1869 F Miescher 首次从莱茵河鲑鱼精子中分离DNA 。 心法则”和操纵子学说,成功地破译了遗传 密码，阐明了遗传信息的流动与表达机 1957 A.Kornberg从大肠杆菌中发现了DNA 聚合酶I 。 制。 1959- Ochoa 发 现 RNA 聚 合 酶 和 信 使RNA ， 并 证 明 1960 mRNA 决定了蛋白质分子中的氨基酸序列。