第四章核酸分子杂交.pptVIP

* 第四章 核酸分子杂交 第一节 核酸分子杂交的原理 一、核酸的紫外吸收 核酸的特征紫外吸收波长为260nm。 二、核酸的变性与复性 核酸的变性是指在理化因素作用下，DNA双螺旋结构遭到破坏的过程。 核酸在受热情况下的变性称为热变性。 变性DNA存在增色效应。 热变性过程中变性一半时的温度称为Tm值。 核酸的复性是指变性核酸在去掉变性因素后又恢复其双螺旋结构的过程。 复性DNA存在减色效应。 核酸杂交是指不同来源的变性核酸在去掉变性因素后其互补序列形成双螺旋结构的过程。 三、杂交动力学 四、杂交体系的建立 1、离子强度：离子浓度越高，杂交越容易，一般用5×SSC或6×SSC（1×SSC含0.15mol/L NaCl和0.015 mol/L柠檬酸钠) 2、DNA的浓度：一般是浓度越高杂交越快。杂交液的量一般为50~100ul /1cm2杂交膜，探针量为0.1~0.5ug/次,探针浓度太高对杂交并没有好处。 3、DNA探针的长度：一般为50~300碱基，太长由于扩散慢对杂交不利，太短也不利于杂交。 4、温度：大多数杂交反应在68℃进行，含有50%甲酰胺的体系在42℃进行。 第二节 核酸分子杂交的基本方法 Southern印迹杂交的检测对象是DNA Northern印迹杂交的检测对象是RNA Western杂交的检测对象是蛋白质 斑点杂交和狭缝印迹杂交的方法既可检测DNA，也可检