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第二章 显微镜及其附加设备 第一节 显微镜的光学原理 第二节 显微镜的基本构造 第三节 生物光学显微镜的种类 第四节 电子显微镜 第一节 显微镜的光学原理 一、显微镜的光学原理 二、显微镜的光学性能 三、复式显微镜的光学原理 一、显微镜的光学原理 成像原理 光射到物体上，再从物体射入物镜、目镜，最后射入观察者的眼睛，在此过程中成像并放大。 二、显微镜的光学性能 分辨率 放大率 镜口角 焦点深度 镜像亮度 视场直径 覆盖度 工作距离 分辨率 分辨率是指能区分两个物点间最小距离的能力。两物点间的最小距离称为分辨距离。分辨距离越小，分辨率越高，也就是分辨细微结构的能力越大。 普通光学显微镜分辨率的极限是0.2μm。可把物体放大1500倍 。 放大率 放大率就是放大倍数，是指被检验物体经物镜放大再经目镜放大后，人眼所看到的最终图象的大小对原物体大小的比值，是物镜和目镜放大倍数的乘积。 总放大率=物镜放大率×目镜放大率 镜口角 孔径角又称“镜口角”，是物镜光轴上的物体点与物镜前透镜的有效直径所形成的角度。 孔径角越大，进入物镜的光通亮就越大，它与物镜的有效直径成正比，与焦点的距离成反比。 数值孔径 数值孔径（NA）：是物镜前透镜与被检物体之间介质的折射率和孔径角半数的正玄之乘积。用公式表示如下：NA=hsinu/2 。 它与分辨率成正比，与放大率成正比，与焦深成反比，NA值增大，视场宽度与工作距离都会相应地变小。 提高分辨率 降低波长λ值，使用短波长光源。 增大介质n值和提高NA值。 增大孔径角。 增加明暗反差。 焦深 焦深为焦点深度的简称，即在使用显微镜时，当焦点对准某一物体时，不仅位于该点平面上的各点都可以看清楚，而且在此平面的上下一定厚度内，也能看得清楚，这个清楚部分的厚度就是焦深。 焦深与总放大倍数及物镜的数值孔镜成反比。焦深大，分辨率降低。 镜像亮度 镜像亮度是指显微镜观察中的图像明暗程度。 NA值越大，镜像的亮度就越大，总放大倍数就越好。 视场亮度 视场亮度是显微镜所观察的整个视场（或视野）的明暗程度。 它与物镜、目镜、聚光镜、视场光阑、光源等因素有关。 视场亮度大，镜像亮度大。 视场直径 视场直径也称视场宽度，是指在显微镜下看到的圆形视场内所能容纳被检物体的实际范围。 覆盖度 覆盖度：显微镜的光学系统也包括盖玻片在内。由于盖玻片的厚度不标准，光线从盖玻片进入空气产生折射后的光路发生了改变，从而产生了相差，这就是覆盖差。 国际上规定，盖玻片的标准厚度为0.17mm, 许可范围在0.16-0.18mm., 工作距离 工作距离也叫物距，即指物镜前透镜的表面到被检物体之间的距离 。 平时习惯所说的调焦？ 机械筒长 从镜筒的肩部（目镜下缘）到物镜螺旋肩部之间的长度叫机械筒长，一般它的长度为160mm。 三、复式显微镜的光学原理 显微镜一般分为光学显微镜和非光学显微镜 光学显微镜又可分为单式显微镜和复式显微镜。 非光学显微镜为电子显微镜。 明视距离 从眼球的水晶体到放大的虚像之间的距离叫明视距离 ，它的长度为250mm，这是观察显微镜中物像最适宜的距离。 第二节 显微镜的基本构造 一、物镜 二、目镜 三、聚光器 四、载物台和光源 一、物镜 物镜分前透镜和后透镜。 高倍镜为弹簧物镜。 一、物镜 （一）几个概念 （二）物镜的种类 （一）几个概念 齐焦 色差 球差 场曲 齐焦 反映某一倍数的物镜观察图像清晰后，在转换至另一倍率的物镜时，其成像亦应基本清晰，且物镜光路也基本合轴，中心不偏离。 色差 色差是指光线通过一个透镜后，不能使所有颜色的光都聚在一个焦点上，而是残次不齐的。 球差 球差也称球面差、球面像差，指透过透镜边缘的光线曲折度大于透过中央部分的现象，会聚的焦点参差不齐，使成像不清晰，有时变形。 场曲 场曲也称像场弯曲，指整个像平面是一个曲面，这样的像平面是不清晰地。 物镜种类 干燥系物镜 油浸系物镜 水浸系物镜 功能：a 产生物体的第一次倒立实像。 b 放大作用 油镜的使用方法 (1)首先用低倍干系物镜找出要观察的区域。 (2)当标本被照明时，把一滴(不要多于一滴)浸油准确地滴到盖玻片上的照明区域，并注意不要在滴入的浸油里混有气泡。 (3)在现代显微镜中，用干系物镜聚焦标本后可以在不改变粗调和细调的情况下转动物镜转换台直接把油浸物镜浸到油里。 油镜的使用方法 (4)当油浸物镜已经浸入浸油之后，用细调进行进一步的调节直到像被清晰地聚焦，并在细调旋钮的刻度尺上记下所转动的刻度。当第一次聚焦使用固定的低倍干系物镜时，每次使用油浸物镜的聚焦都需要相同的调节，即沿着同样的方向使细调转动相同的刻度。 物镜种类 消色差物镜 复消色差物镜 半复消色差物镜 平场物镜 特种物镜 消色差物镜