第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi培训讲学.pptVIP

第 10 章 基因诊断   Gene diagnosis China Medical University  Department of Medical Genetics ; 本章内容提示;第一节 基因诊断技术 第二节 基因诊断方法及实例; 基因诊断： 利用分子生物学技术从DNA 水平检测人类遗 传性疾病的基因缺陷，又称DNA分析法。 传统的诊断：表现型→基因型 基 因 诊 断：基因型→表现型 （ 逆向诊断）;第一节 基 因 诊 断 技 术;基 因 诊 断 技 术;基 因 诊 断 技 术;基 因 诊 断 技 术;基 因 诊 断 技 术;基 因 诊 断 技 术;基 因 诊 断 技 术;基 因 诊 断 技 术;基 因 诊 断 技 术;基 因 诊 断 技 术;基 因 诊 断 技 术;基 因 诊 断 技 术;第二节 基 因 诊 断 方 法及实例;一 DNA多态;DNA分析中常用的遗传性多态性标记有3类：;一) 限制性片段长度多态性;Allele II 产生了新的酶切点 ;AlleleII酶切位点消失 ;二)数目变异串联重复，variable number tandem repeats, VNTR）;VNTR两侧酶切位点固定，但两酶切点之间的串联重复拷贝数不同，酶切后产生不同长度的片段。 DNA多态可以通过PCR扩增后电泳来检出，称扩增片段长度多态（amplified fragment length polymorphism, Amp-FLP）;VNTR 酶切，电泳后的检测结果;PCR-VNTR检测;PCR-VNTR;;三)单核苷酸多态性（SNP） （Single Nucleiotide Polymorphism） ;二、基诊断方法及实例;直接基因诊断— 突变型遗传病的直接基因诊断;1）Southern blot β珠蛋白链基因第6位密码子发生突变 GAG——GTG 谷Aa——缬Aa;;2) ASO探针诊断;等位基因特异性寡核苷酸探针（ASO） （Allele-specific-oligonucleotide ） ;斑点杂交结果：;突变型遗传病的直接基因诊断;BamHI;Southern blot 检测结果：;;以βGene为探针，Southern blot 方法检测;3） DMD的基因诊断;病例;二）间接基因诊断方法及实例; 连锁分析基于遗传标记与Gene在染色体上连锁， 通过对受检者及其家系进行连锁分析，分析子代获得某种遗传标记与疾病的关系，间接推断受检子代是否获得带有致病基因的染色体，间接地判断并做出诊断。 遗传标记是基因组中的DNA 多态 如：RFLP，VNTR 等。;??传标记;1 Southern blot--RFLP诊断(PKU);患者为19kb片段的纯合子,说明患者缺陷的PAH基因与19kb片段连锁 其父、母亲缺陷的PAH基因与19kb片段连锁，其23kb片段与正常PAH基因连锁。 II2为23kb 和19kb片段的杂合子，为表型正常的致病基因携带者。 ;2 成年型多囊肾病的诊断; 以3`HVR为探针，与PvuII酶切后的家系有关成员的基因组DNA进行Southern Blot ; 1 2 1 2 3 4 5  5.7kb 3.4kb 2.3kb ;结果分析;3 甲型血友病诊断（PCR—RFLP）;间接基因诊断; ;结果分析;单体型分析; 举例：PKU家系 Hind Ⅲ 酶切： 患儿4.2/4.0kb杂合体 父母4.2/4.0kb杂合体 均为杂合体，无法分析。 再用sphⅠ酶切：患儿 纯合7.0kb