响应葡萄根瘤蚜侵染的扩展蛋白基因筛选及其多克隆抗体的制备.pdfVIP

园艺学报，2016 ，43 (1) ：15 –24. Acta Horticulturae Sinica doi ：10.16420/j.issn.0513-353x.2015-0574；http ：//www. ahs. ac. cn 15 响应葡萄根瘤蚜侵染的扩展蛋白基因筛选及其 多克隆抗体的制备 1 2 1 1,* 季兴龙 ，韩 宁 ，翟 衡 ，杜远鹏 1 2 （山东农业大学园艺科学与工程学院，作物生物学国家重点实验室，山东泰安 271018 ； 齐鲁工业大学生物工程学 院，济南 250353 ） 摘 要：以对葡萄根瘤蚜敏感的‘克瑞森无核’葡萄（Vitis vinifera ‘Crimson Seedless ’）组培苗和抗 性砧木‘1103P’组培苗为试材，通过荧光定量PCR 技术从扩展蛋白基因家族中筛选到经根瘤蚜侵染后表 达上调的扩展蛋白基因家族成员 VvEXPA1。采用RT-PCR 方法克隆到 VvEXPA1 基因片段，连接至原核表 达载体 pET-32a 中，转化大肠杆菌 DE3 菌株，测序确定构建的重组载体 pET32a- VvEXPA1 开放阅读框正 确，并经 IPTG 诱导表达了融合蛋白。该蛋白以包涵体的形式存在，纯化后免疫新西兰兔，制备扩展蛋白 多克隆抗体，通过 Western-blot 和 ELISA 检测抗体的特异性及效价。结果显示制备的抗体具有较高的特 异性，ELISA 显示效价为 1 ︰51 200 。 关键词：葡萄；根瘤蚜；扩展蛋白；VvEXPA1；多克隆抗体制备 中图分类号：S 663.1 文献标志码：A 文章编号：0513-353X （2016 ）01-0015-10 Identification of VvEXP Gene from Grape Roots Infected by Phylloxera and Preparation of Polyclonal Antibody to Grape Expansin 1 2 1 1,* JI Xing-long ，HAN Ning ，ZHAI Heng ，and DU Yuan-peng 1 （College of Horticulture Science and Engineering，Shandong Agricultural University ，State Key Lab of Crop Biology ， 2 Tai’an，Shandong 271018 ，China； College of Bioengineering，Qilu Technology of University，Ji’nan 250353 ，China） Abstract ：Based on qRT-PCR method ，an expansin （VvEXPA1）was acquired and investigated from infected Crimson Seedless grape and 1103P grape rootstock in present study. VvEXPA1 was cloned into prokaryotic expression vector pET32a after identification by enzymatic digestion and sequencing ，and then the recombinant plasmid with VvEXPA1 was transformed into E. coli DE3. The results showed tha