实验五 酶联免疫吸附试验.pptVIP

微生物学实验 实验五 酶联免疫吸附试验 ELISA 二、实验标本及器材 乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒 三、实验原理 乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒采用双抗体夹心法检测HBsAg，采用抗-HBs包被板条，用HRP标记的抗-HBs为酶标记物，以四甲基联苯胺（TMB）和过氧化物为底物。当标本中存在HBsAg时，该HBsAg与包被抗-HBs结合并与抗-HBs-HRP结合形成抗-HBs- HBsAg-抗-HBs-HRP复合物，加入TMB底物产生显色反应。在实验结束时，有颜色变化的提示有HBsAg存在，无颜色或颜色变化微弱的则提示不存在HBsAg。 三、实验原理 三、实验原理 四、实验步骤 1、实验准备：从冷藏环境中取出试剂盒，在室温下平衡30分钟，同时将浓缩洗涤液做1比20稀释。 2、加待测标本：设阴性、阳性对照各一孔，分别加入阴性、阳性对照0.1毫升，空白对照一孔，其余各孔加入待测标本0.1毫升。 3、加酶结合物：每孔0.1毫升，空白对照孔不加，充分混匀，37摄氏度温育30分钟。 四、实验步骤 4、洗板：弃去反应孔板内液体，在吸水纸上拍干，用洗涤液注满每孔，静置5至10秒，弃去孔内洗涤液，拍干，如此反复5次，拍干。 5、加显色剂：先加显色剂A，每孔0.05毫升，再加显色剂B，每孔0.05毫升，充分混匀，置37摄氏度温育15分钟。 6、终止反应：每孔加入终止液0.05毫升，混匀。 五、实验结果 六、注意事项 1、洗板至关重要，应避免洗涤液过量，又能充满反应微孔，洗板次数不应少于5次。 2、如任何试剂接触皮肤和眼睛，应用大量清水对该部位进行扩大清洗和消毒。 3、终止液为硫酸，具有腐蚀性。 * * 病原生物学免疫学实验室 一、实验目的 1、了解ELISA-HBsAg的检测原理 2、掌握酶联免疫吸附试验的操作方法