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实验二十二甲壳素和壳聚糖的制备及测定 冃的要求 （1） 了解和掌握「卩壳索和壳聚糖的制备方法。 （2） 掌握壳聚糖的测定方法。 原理 甲壳索（Chitin,译音儿丁）又称甲壳质、壳多糖、儿丁质等。它是在1811年，被法 国科学家H -Braconnot在进行蘑菇研究的，从霉菌发现的。在蠻等硬壳中，含甲壳素15%? 20%,碳酸钙75%。甲壳素是聚-2■乙酰胺基?2-脱氧比喃葡萄糖,以—（1-4）糖莒 键连接而成，是一刑线性的高分子多糖，即犬然的小性粘多糖。它的分子结构与纤维索有些 相似,基本单位是壳二糖（chitobiose）,其结构式如下: 甲壳素若经浓碱处理，进行化学修饰去掉乙酰基即得到壳聚糖（Chitosa）又称脱乙酰 基壳多糖、脱乙酰甲壳素。 在一般条件下，甲壳素不能被生物降解，不溶于水和稀酸，也不溶于-?般有机溶剂。食 品工业及水产加工地区有大量虾皮、虾头，蠻壳等下脚，可以利用来制备甲壳素和壳聚糖等。 壳聚糖具冇广泛的用途：在食品工业匕把壳聚糖在温和的条件下，局部水解后粉碎成末, 得到的売聚糖产品称为微晶売聚糖，可用作冷冻食品（冷肴、汤汁、点心）和室温存放食品 （蛋黄、酱等）的增稠剂和稳定剂。用水解方法可以制得纯的N-乙酰氨基葡萄糖。N-乙酰 氨某葡萄糖是肠道中双义乳酸杆菌的生氏因子，因此可作为婴儿食品的保健添加剂。在医药- 工业上，由于壳聚糖是类似纤维状的高分子化合物，和生物体有良好的亲和作用，在生物体 内可被分解吸收，所以用它可制作手术线，伤好后线与肉长在一?起，可免去拆线之苦；用 它做人造皮肤，植入受伤伤口，可长岀新的不带疤痕的表皮；还可用于制作人造血管、人工 肾；用壳聚糖制成的微型胶囊，放入药剂，植入人体内，很容易结合在一起，使药物缓慢地 释放，起到长期治疗的效果；用它还可制成透析膜、超滤膜和脱盐的反渗透膜，与纤维索等 的交联复合体可作为分子筛，用作药物的载体，具有缓释、特效的优点，国外正研究作许多 药物的缓释剂。若以戊二醛等作交联剂，可与许多輛或微生物细胞固定化，如固定化天门冬 酰胺酚；壳聚糖是碱性多糖，有止酸、消炎作用，可抑制胃溃疡；动物实验表明，还可降低 胆固醇、血脂，国外已报道用作心血管系统降低胆固醇的药物；经分了修饰制得肝素类似结 构物，具抗血栓作用。据报道，由壳聚糖可制备抗凝血素，防I匕凝血酵素原转化为凝血酵素, 抑制血液中纤维蛋白原转变成纤维蛋白而不呈凝血现象。壳聚糖是一种天然高分子螯合物, 用它处理含金属的废水，既可净化污水，乂可回收金属，它还可以同具有阳离子的活性泥、 蛋口质及一些固休微粒结合，因此一些肉类加工厂、食品厂和酿酒厂利用它处理废水，使废 水排放达到-?般标准。在tl化工业上，壳聚糖可作为化妆品和护发素的添加剂，增强保护皮 肤、固定发型的作用。在农业上，用壳聚糖处理的植物种了，町以增强抗病虫害的能力，提 高产量。在水果加工中，壳聚糖溶剂可使水果保鲜度延长数月。 甲壳素都是与大量的无机盐和壳蛋口紧密在i起的。因此，制备甲壳素主要有脱钙和脱 蛋白两个过程。用稀盐酸漫泡虾、邂壳，然后再用稀碱液浸泡，将壳中的蛋白质举取出来, 最后剩余部分就是甲壳素。 采川不同的方法可以获得不同脱乙酰度的売聚糖。最简单、最常川的是采川碱性液处理 的脱乙酰方法。即将已制备好的甲壳素用浓的氢氧化钠在綾高温度下处理，就可得到脱乙酰 壳多糖。 测定甲壳素脱乙酰基的程度，实际上可以通过测定壳聚糖中口由氨基的量来决定。壳聚 糖中自由氨基含量越高，那么脱乙酰程度就越高，反乙亦然。壳聚糖中脱乙酰度的大小直接 影响它在稀酸屮的溶解能力、黏度、离子交换能力和絮凝能力等，因此芫聚糖的脱乙酰度大 小是产甜质量的重要标准。脱乙酰度的测定方法很多，如酸碱滴定法、苦味酸法、水杨醛法 等。 本实验采用苦味酸法测定壳聚糖的乙酰度。苦味酸通常用于不溶性高聚物的氨基含最的 测定。在甲醇中苦味酸可以与游离氨基在碱性条件下发牛?定量反应。同样，苦味酸也可以与 甲壳索和売聚糖中游离氨基发牛反应。由于甲売索和売聚糖均不溶于甲醇，而二界丙基乙胺 能与结合到多糖上的苦味酸形成一种可溶于甲醇的盐，这种盐能从多糖上禅放出来。该盐在 358 nm的吸光值与其浓度（0?115umol/L）呈线性关系。通过光吸收法测定这种盐的浓 度，即可推算出甲壳素和壳聚糖上氨基的数量，进而计算出样品的乙酰度。此法的优点是: 适用于从高乙酰度到不含乙酰度的宽范围，无需复杂设备。英样品量只需数亳克至数十毫克。 原料、试剂和器材 —、原料 新鲜虾壳。 二、试剂 10 mol / L苦味酸甲醇液：称取苦味酸（picric acid, 乂称三硝基苯酚）2290.0g,定 容于1L甲醇液中。0」mol/L和0.1 mmol / L苦味酸甲醇液由10 mol/L液稀释得到。 0」m ol/L