第2章 工业微生物的菌种选育.pptVIP

一、工业微生物的特点 个体小 种类多 繁殖快 分布广 代谢能力强 易变异改造 二、发酵工业对菌种的要求 1.生产力： 能在廉价的培养基上迅速生长，代谢产物的产量高，其它代谢产物少 2.操作性： 发酵条件易控制，菌种改造的可操作性要强（有关合成产物的途径尽可能地简单），产品易分离 3.稳定性： 抗杂菌和抗噬菌体能力强，遗传性状稳定，菌种不易变异退化 4.安全性： 是非病源菌，不产有害生物活性物质或毒素 三、菌种选育的目的 1、提高发酵产量 2、改进菌种的性能 3、产生新的发酵产物 4、去除多余的组分 四、菌种选育的基本理论 （一）菌种选育的理论基础 （二）突变诱发的过程 （一）菌种选育的理论基础 遗传和变异 基因突变是指由于染色体和基因本身的变化而产生的遗传性状的变异。 （二）突变诱发的过程 （二）突变诱发的过程 （二）突变诱发的过程 （二）突变诱发的过程 （二）突变诱发的过程 （二）突变诱发的过程 四、菌种来源 从菌种保藏中心购买 育种 从自然界中筛选 诱变 杂交育种 基因工程育种 CGMCC 中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（China General Microbiological Culture Collection Center）成立于1979年，是以提供专业技术服务为主的公益性机构，1995年获得布达佩斯条约国际保藏中心的资格，是我国唯一同时提供一般菌种资源服务和专利生物材料保存的国家级保藏中心。中心设立在中国科学院微生物研究所。 第二节 自然选育 一、定义 二、方法 三、特点及应用 第二节 自然选育 第二节 自然选育 第二节 自然选育 三、特点及应用 简单易行、自发突变的效率低。 纯化菌种，防止菌种衰退、稳定产量和提高产量 1、目前生产用菌种的特点 　多为人工诱变而来。 　代谢调控系统失控。 　生活力比野生菌株弱。 　容易发生变异。 第三节　诱 变 育 种 一、定义及特点 二、诱变剂 三、诱变育种的主要环节 第三节　诱 变 育 种 诱变育种： 通过诱变剂处理提高菌种的突变频率，扩大变异幅度，然后采用简便、高效的筛选方法，从中选出具有优良特性的变异菌株的方法。 特点： 速度快、收效大、方法简便，但缺乏定向性。 第三节　诱 变 育 种 物理诱变剂：射线如紫外线、X-射线、γ-射线，快中子； 化学诱变剂：氮芥、化学因子如碱基类似物、 5-氟尿嘧啶、亚硝酸、亚硝基胍等。 生物诱变剂：溶原性噬菌体，人工构建的质粒、转座子 第三节　诱 变 育 种 第三节　诱 变 育 种 1.出发菌株的选择 2.诱变处理 3.筛选 4.突变菌株高产基因的表达 选择纯种菌株（排除异核体） 优良性状的菌株（产生孢子、生长速度） 对诱变剂敏感的菌株 同时选择几株不同的优良菌株 1）选择原则 不稳定菌株→温和的、常用的诱变剂； 稳定菌株→强烈的、不常用的、诱变谱广的诱变剂 不经常使用一种诱变剂，也不宜频繁更换。 注意考虑诱变剂本身的特点。 UV →DNA的嘧啶碱基；亚硝酸→嘌呤碱基 高剂量：致死率90%-99.9% 变异幅度大，但负变株多 低剂量：致死率75%-80% 负变株少，且突变菌株稳定 3.筛选 根据步骤可以分为初筛和复筛 初筛 菌株的量要大，发酵和测试的条件都可粗放些，采用一个菌种进一个摇瓶的方法进行初筛 复筛 对发酵和测试条件要求应逐步提高，复筛一般每个菌株进3~5个摇瓶，如果生产能力继续保持优异，再重复筛选几次。 初筛和复筛均要有亲株作对照比较生产能力是否优良。 复筛后的优良菌株要考查其稳定性、菌种特性和最适培养条件 根据操作方法可分为随机筛选和理性化筛选 随机筛选 96孔板高通量孵育筛选 理性化筛选 1 ）筛选用培养基 ⑴ 基本培养基：凡是能满足某种野生型菌株营养要求的最低成分的合成培养基，称为基本培养基；常以‘[-]’表示； ⑵ 在基本培养基中加入一些富含氨基酸、维生素及含氮碱基之类的天然有机物质如蛋白胨、酵母膏等，以满足该微生物的各种营养缺陷型菌株都能生长繁殖的培养基，称为完全培养基，常用‘[+]’表示； ⑶ 在基本培养基中只是有针对性地加入某一种或某几种营养缺陷成分，以满足相应的营养缺陷型生长的培养基，称为补充培养基，补充培养基可按所加入营养成分相应地用‘[A]’、‘[B]’等来表示。 2）营养缺陷型菌株筛选的一般方法 （1）诱变剂处理 （2）淘汰野生型菌株 ① 抗生素法 ② 菌丝过滤法 （3）检出营养缺陷型 （4）鉴定营养缺陷型 检出营养缺陷型 将突变菌株放到完全致死的环境中，一次性筛出抗性突变株。 包括：抗生素、金属离子、温度、噬菌体 ①抗生素抗性突变：提高产量； 　②抗噬菌体突变：消除噬菌体污染； ③条件抗性突变：如温度，可提高产量； 培养基