微生物分子生态学研究方法进展.docVIP

宁波大学硕士研究生2009/2010学年第1学期期末考试卷 考试科目： 实验生态学 课程编号： 07G13104A 姓名： 钱伟 学号： 0911091019 成绩： 90 微生物分子生态学研究方法进展 摘要：现代分子生物学技术在生态学研究中的应用大大推动了微生物生态学的发展，导致了微生物分子生态学的产生。微生物分子生态学方法弥补了传统的微生物生态学方法的不足，使人们可以避开传统的分离培养过程而直接探讨自然界中微生物的种群结构与环境的关系。微生物生态学研究中采用的分子生物学方法主要有核算探针技术、PCR扩增技术、rRNA序列同源性分析方法、梯度凝胶电泳方法等。这些技术方法的采用，取得了一系列重要的成果和微生物生态学研究中的突破，使得对某些微生物的研究成为可能，并在分子水平上阐述了生态问题的机制。 关键词：微生物分子生态学；核算探针杂交；PCR；变性梯度凝胶电泳 Development in Research Methods of Microbial Molecular Ecology Abstract：Application of the modern molecular biology technology in ecology greatly promoted the development of microbial ecology, leading to the microbial molecular ecology. Microbial molecular ecology compensated for deficiency of the traditional microbial ecology method making people avoid the traditional separation process and discuss the relationship between the population structure and environment directly. The application of molecular methods such as nucleotide probes hybridization, PCR amplification technologies, r RNA sequence homology analysis method and denaturing gradient gel electrophoresis, etc. the adoption of these techniques had a series of important achievements, making the study of certain microorganisms become possible and expound the mechanism of ecological problems under the molecular level. Keywords：microbial molecular ecology; nucleotide probes hybridization; PCR; denaturing gradient gel electrophoresis 1 引言 微生物生态学这门学科出现在20世纪60年代早期。之后，环境问题日益引起人们的关注。与此同时，微生物生态学得到了迅速的发展。20世纪末引入分子生物学技术之后，微生物生态学的研究得到了更深的发展。许多研究已经证实，通过传统的分离方法鉴定的微生物只占环境微生物总数的0.1%~10%，远远不能满足微生物生态学研究的需要[1,2]。分子微生物生态学是分子生物学实验技术应用于微生物生态学研究领域而发展形成的一门交叉学科，在研究微生物生态系统的组成结构、功能的分子机理以及微生物与生物和非生物环境间的相互关系等方面显示了巨大的潜力。十几年来分子微生物生态学研究所取得的成就证明：分子生物学研究技术向微生物生态学领域的不断渗透，为微生物生态学研究领域注入了新的活力，尤其在微生物区系分子组成及变化规律、微生物多样性以及微生物系统进化研究方面取得了重大突破[3]。 2 微生物分子生态学技术 2.1 核算探针杂交技术 核酸杂交技术能够灵敏地探测出环境微生物中特殊的核苷酸序列，并且用光密度测定法可直接比较核酸杂交所得到的阳性条带或斑点就能得出定量的结果，从而反映出相关微生物的存在及功能。标记核苷酸探针可直接用来探测溶液中、固定在膜上、细胞或组织内的同源核酸序列。探针可以是长探针（100bp~1000bp），也可以是短的寡核苷酸（10~50bp）。杂交方式可以是狭缝杂交、菌落杂交或原