庚型肝炎病毒NS5cDNA片段表达和其免疫原性研究.PDFVIP

维普资讯 第 16卷2期 中 国 病 毒 学 16(2 114 118 2001年 6月 VIR0L0GICA SINICA 11m 2001 庚型肝炎病毒NS5cDNA片段的表达及其免疫原性的研究 龚睿 ，马辉文p ，童立恒 (1武设大学生命科学学院，湖北武汉 430072： 2武汉市生物技术研究开发中心．湖北武汉 430033 Expression inE ．CotiandAntigenicityofHGV NS5Protein GONG Rui，MA Hul—wen ”，TONG Li—heng (1．CollegeofL Sciences，WuhanUniversity，Wuhan430072，China 2 WuhanR＆DCenterforBt ^n。 ，Wuhan430033，China) Abstract：A 880bpcD A localizedtotheputativeNS5regionofHGV genomewasexpressedinE． colfBL2I(DE3) The eDNAfragmentwasinsertedinotaplasmidpGEX-5X一1，atthedownstream of the DNA sequenceencodingSchistosomajaponicum glutathioueS_transferaes(GST)，intheS~~TIe readingframewiththegeneofGST．A 60KD GS丁_ S53fusionproteinwasexpressedat37℃ ina forillofnclusionbodiesamountingto30percentofottalhostproteinwhereasat20℃ mainlyinaform ofsolublepmtein Thefusionproteinwasextractedandpurifiedtohomologue，ThepurifiedGST— NS53fusionprotein couldbespecificallyrecognizedwitheitherthe esrafrom thepatientinfectedby HGV ortheantiseradirectedagainstGST Keyword：HGV NS5pmtein；Geneexpression；Antigenidty 摘要：一段长度为880bp的庚型肝炎病毒 eDNA在太肠杆菌BL21(DE3)菌株中得到表达。此 eDNA被插入到表 达质粒pGEX-5X-I中，位于编码 日本血吸虫答胱甘肽硫转移酶 (GST)的DNA序列下游，并与GST处于同一阅读 框。用乳糖在 37C下诱导表达出以包涵体形式存在的GST-NS53融合蛋白，并用脲溶法提取 了该蛋白；在 20℃诱 导时，表达出的蛋白大部分可溶．用各胱甘肽 Sepharose4B亲和层析柱对可溶性的融合蛋白进行了纯化。免疫印迹 实验证明，此融合蛋白能被庚型肝炎病人的血清和 自制的抗GST血清特异性地识别。用 PCgene软件对NS53氨 基酸序列的亲水性和抗原决定簇进行了分析。本研究为庚型肝炎ELISA诊断试剂研制打下了基础。 关键词：庚肝病毒非结构蛋白i基因表达；免疫原性 中圉分类号：R37321 文献标识码 ：A 文章编号 ：1003—5125{2001)02．0114—05 庚型肝炎病毒(HGV)是近年来发现的主要经 端的E1和E2包膜蛋 白区和其后的NS1一NS5五种 血液 、体液传播的单正链 RNA