转基因高通量检测技术研究进展-江苏农业科学.pdfVIP

江苏农业科学　２０１９年第４７卷第１期 — ２７— 李夏莹，陈　锐，刘鹏程，等．转基因高通量检测技术研究进展［Ｊ］．江苏农业科学，２０１９，４７（１）：２７－３０． ｄｏｉ：１０．１５８８９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２－１３０２．２０１９．０１．００６ 转基因高通量检测技术研究进展 １ ２ １ １ １ １ １ １ 李夏莹 ，陈　锐 ，刘鹏程 ，王颢潜 ，梁晋刚 ，张旭冬 ，李文龙 ，张秀杰 （１．农业农村部科技发展中心，北京 １００１７６；２．天津市农业质量标准与检测技术研究所，天津３００１９２） 　　摘要：转基因技术在农业领域的应用与发展日新月异，转基因检测的需求日趋多样化、复杂化，现有的转基因检测 技术体系已经很难满足转基因产业快速发展的需要。近年来，以ＰＣＲ阵列技术、芯片技术、ＤＮＡ测序技术为代表的转 基因高通量检测技术发展迅猛。本文就这一领域的研究进展作一简要概述。 　　关键词：转基因；高通量；芯片；ＤＮＡ测序 　　中图分类号：Ｓ１８８　　文献标志码：Ａ　　文章编号：１００２－１３０２（２０１９）０１－００２７－０４ 　　以基因工程为核心的现代生物技术不仅在资源、环境和 １　ＰＣＲ阵列技术 医药等方面日益发挥着重要作用，在农业领域的应用与发展 也十分迅猛。２０１６年是转基因作物商业化的第２１年，转基 聚合酶链式扩增技术（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）是 ２ 因作物的种植面积从 １９９６年的１７０万 ｈｍ 迅速上升到至 目前应用最广的转基因方法，包括定性 ＰＣＲ和定量 ＰＣＲ ２ ２０１６年的１．８５１亿ｈｍ，实现了近１１０倍的增长。２０１６年也 （ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅＰＣＲ，ｑＰＣＲ）。多重ＰＣＲ（ｍｕｌｔｉｐｌｅｘＰＣＲ）可在同 是转基因水果和蔬菜的商业化快速发展元年，美国与加拿大 一个反应中同时扩增检测２个或多个目标基因序列，具备高 先后批准了改善营养指标的转基因马铃薯和耐储存的转基因 通量检测的潜质。但由于多重ｑＰＣＲ之间的引物干扰，同时 苹果的市场销售。２０１６年，全球２６个国家种植了转基因作 在１个反应管中设计的多重ｑＰＣＲ最多５～６重，很难满足实 物，其中包括１９个发展中国家和７个发达国家。发展中国家 际检测需求。 种植的转基因作物占总面积的５４％，而发达国家占４６％。包 随着转基因农作物种植面积的激增和品种的日益丰富， 括中国和印度在内的８个亚太地区国家，在２０１６年种植了 检测需求也随之扩大，现有的检测方法通量低、过程繁杂，很 ２ １８６０万ｈｍ 转基因作物。２０１６年转基因作物的最大种植国 难满足转基因检测需求。近年来基于ｑＰＣＲ的另一种策略逐 仍然是美国、巴西、阿根廷、加拿大和印度。这５个国家加起 步被关注和报道，即利用内含特定引物组合的９６孔或３８４孔 ［１］ 来的种植面积达到了全球转基因作物种植面积的９１％ 。 预制板用于高通量转基因筛查。预制板内含有指定浓度的特 截至目前，我国共批准发放７种转基因作物安全证书，分别是 异引物，形成规律性的矩阵，可同时用于同一模板 ＤＮＡ的多 耐储存番茄、抗虫棉花、改变花色矮牵牛、抗病辣椒、抗病番木 重检测。该方法也被称为实时定量ＰＣＲ阵列／芯片法（ｒｅａｌ－ 瓜、转植酸酶玉米和抗虫水稻，但只有抗虫棉和抗病毒木瓜实 ｔｉｍｅＰＣＲａｒｒａｙ），结合已知的转基因信息列表，这种转基因检 现了大规模商业化生产。二十多年来转基因商业化进程带来 测策略能够有效地简化试验操作，增加检测通量。 的巨大经济、社会效益和显著的生态效益已充分显现，它的推 ＰＣＲ阵列技术最早由欧盟联合研究中心的