蜡梅CpAGL6基因启动子的克隆及功能初步分析.pdfVIP

园艺学报，2015 ，42 (6) ：1139 –1149. Acta Horticulturae Sinica doi ：10.16420/j.issn.0513-353x.2014-1058；http ：//www. ahs. ac. cn 1139 蜡梅CpAGL6 基因启动子的克隆及功能初步分析 敬 帆，罗登攀，马 婧，李名扬* （西南大学园艺园林学院，重庆市花卉工程技术研究中心，南方山地园艺学教育部重点实验室，重庆 400715 ） 摘 要：利用hiTAIL-PCR 法，从蜡梅（Chimonanthus praecox ）基因组中克隆到花发育相关基因 CpAGL6 翻译起始位点上游 1 266 bp 的启动子序列。生物信息学分析表明，该启动子序列中存在启动子的基本元件 TATA-box 和 CAAT-box 及多个与植物非生物胁迫相关的响应元件。为进一步分析 CpAGL6 启动子的功能， 构建该基因启动子与 GUS 基因融合的植物表达载体，并用农杆菌介导法转化烟草。对转基因烟草进行 GUS 组织化学染色及 GUS 酶活性定量检测，结果显示，CpAGL6 基因启动子能够驱动 GUS 基因在转基因烟草 的叶、茎、花中表达，并且在不同花期表达强度存在差异，在根中几乎不表达。转基因植株经黑暗、赤 霉素和 4 ℃低温处理后，GUS 酶活性均有所增加。结果表明，CpAGL6 启动子主要驱动 GUS 报告基因在 花器官和绿色器官组织中表达，推测其在抵抗非生物胁迫中具有重要作用。 关键词：蜡梅；CpAGL6 基因；启动子；GUS 基因 中图分类号：S 685.17 文献标志码：A 文章编号：0513-353X （2015 ）06-1139-11 Cloning and Preliminary Functional Analysis of CpAGL6 Promoter from Chimonanthus praecox * JING Fan ，LUO Deng-pan ，MA Jing ，and LI Ming-yang （College of Horticulture and Landscape，Southwest University ，Chongqing Engineering Research Center for Floriculture， Key Laboratory of Horticulture Science for Southern Mountainous Regions ，Ministry of Education ，Chongqing 400715 ， China） Abstract ：The regulative sequence （1 266 bp）of the flower development-related gene CpAGL6 promoter was cloned from genomic DNA of Chimonanthus praecox by hiTAIL-PCR. Bioinformatics analysis revealed that the promoter sequence contained basic cis-elements，such as TATA-box and CAAT-box and many elements involved in the plant abiotic stress. In order to study the function of CpAGL6 promoter ，a promoter-reporter vector was constructed ，and introduced into tobacco by Agrobacterium -mediated method. Then the transgenic tobacco with G