EASYspin Plus 多糖多酚复杂植物RNA快速提取试剂盒操作方法及步骤说明书.docVIP

杭州昊鑫生物科技股份有限公司 htpp:// n 杭州昊鑫生物科技股份有限公司 htpp:// EASYspin Plus Complex Plant RNA Kit EASYspin Plus多糖多酚/复杂植物RNA快速提取试剂盒 目录号：RN53 适用范围： 适用于快速提取植物组织细胞总RNA，使用独有基因组DNA清除柱技术可有效清除电泳可见gDNA残留，RNA可用于反转录PCR，荧光定量PCR等。 试剂盒组成、储存、稳定性： 试剂盒组成 保存 50次(RN5301) 裂解液CLB 室温 50 ml 裂解液RLT Plus 室温 25 ml 去蛋白液RW1 室温 40 ml 漂洗液RW 室温 10 ml第一次使用前按说明加指定量乙醇 RNase-free H2O 室温 10 ml 基因组DNA清除柱 和收集管 室温 50套 RNase-free 吸附柱RA和收集管 室温 50套 本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。 储存事项： 不合适的储存于低温（4℃或者－20℃）会造成溶液沉淀，影响使用效果，因此运输和储存均在室温下（15℃ 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。 注意事项 所有的离心步骤均可在室温完成（4℃离心也可以），使用转速可以达到13,000 rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C 需要自备β-巯基乙醇，乙醇，研钵(可选)。 样品处理量绝对不要超过基因组清除柱DA和和RNA吸附柱RA处理能力，否则造成DNA残留或产量降低。开始摸索实验条件时，如果不清楚样品DNA/RNA含量时可使用较少的样品处理量，将来根据样品试验情况增加或者减少处理量。 裂解液CLB和RLT Plus 和去蛋白液RW1中含有刺激性化合物，操作时戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。 关于DNA 的微量残留: 一般说来任何总RNA提取试剂在提取过程中无法完全避免DNA的微量残留（DNase消化也无法做到100%无残留），本公司的EASYspin Plus RNA提取产品，由于采取了本公司独特的缓冲体系和基因组DNA清除柱技术，绝大多数DNA已经被清除，不需要DNase消化，可直接用于反转录PCR和荧光定量PCR。个别特殊情况如DNA含量过于丰富造成残留或者要进行严格的mRNA表达量分析荧光定量PCR，我们建议在进行模板和引物的选择时： 选用跨内含子的引物，以穿过mRNA中的连接区，这样DNA就不能作为模板参与扩增反应。 选择基因组DNA和cDNA上扩增的产物大小不一样的引物对。 将RNA提取物用RNase-free的DNase I 处理。本试剂盒还可以用于DNase I处理后的RNA清洁(cleanup) ，请联系我们索取具体操作说明书。 在步骤去蛋白液RW1漂洗前，直接在吸附柱RA上进行DNase I柱上消化处理。购买DNA酶柱上消化试剂盒(货号：RN34)前可先索取具体操作说明书。 操作步骤：（实验前请先阅读注意事项） 提示： 第一次使用前请先在漂洗液RW瓶加入指定量无水乙醇! 取1ml裂解液 CLB至离心管内(如果CLB有析出或者沉淀需先置于65°C水浴重新溶解），在裂解液CLB中加入5% β-巯基乙醇（1ml CLB加50μl β-巯基乙醇）。颠倒混匀后65 直接研磨法（实验室无液氮情况下或者柔软易研磨植物样品推荐此法）: a. 新鲜植物组织或者冰冻保存样品称重后取100-200mg（水分少的样品如叶片种子等可加100-150mg，水分多的样品如草莓西瓜果实可多加一些）迅速剪成小块放入研钵，加入 1ml CLB（已加有β-巯基乙醇）室温下充分研磨成匀浆，注意应该迅速研磨让组织和裂解液CLB立刻充分接触以抑制RNA酶活性。 β-巯基乙醇是裂解液CLB的关键成分，必要的时候可以提高终浓度到10-20%。 如果特别复杂植物，可以尝试在裂解液中加入PVP40至终浓度2%。 b. 将裂解物转入离心管，立即剧烈振荡15秒，短时放回 65°C水浴中（5-10 min），中间偶尔颠倒1-2次帮助裂解。13，000rpm离心10分钟，沉淀不能裂解的碎 c. 取裂解物上清（在不超过基因组DNA清除柱能力的情况下可以取更多的上清，这样可以提高产量）转到一个新离心管。加入上清体积一半的无水乙醇(0.5体积)，此时可能出现沉淀，但是不影响提取过程，立即吹打混匀，不要离心。 若上清表面有漂浮物，用吸头挑开吸取下面液体即可。 d. 立刻接操作步骤的步骤3。 液氮研磨法