DNA甲基化与癌症讲义.pptVIP

亚硫酸氢盐测序的原理 1. 直接测序法 1. 直接测序法 注： A：癌组织；B：癌旁组织；○-：未甲基化；●：甲基化 43A 43B M 43AE 43A 43BE 43B (369bp) 43B 2. 重亚硫酸盐转化后PCR克隆测序 2. 重亚硫酸盐转化后PCR克隆测序 3. 甲基化特异性PCR 3. 甲基化特异性PCR U M U M U M ladder 100 150 200 250 MSP法检测抑癌基因RASSF1A启动子区的甲基化 图 MSP检测组织切片DNA甲基化状态电泳图片 甲基化特异性PCR（MSP）结果，U为非甲基化，M为甲基化。 4. 结合重亚硫酸盐的限制性内切酶法 5. 基于限制性内切酶的甲基化分析方法 6. 基于亲和纯化的甲基化分析方法 三、DNA甲基化与癌症 DNA甲基化与癌症 DNA甲基化与癌症的发生发展有着密切的联系，DNA甲基化改变包括高甲基化和去（低）甲基化。 对不同肿瘤细胞的DNA分析表明，癌变细胞中出现基因突变的概率要远远低于预期，与基因突变相比，DNA甲基化改变在细胞恶变过程中可能发挥了更大的作用。 DNA甲基化与癌症的发生发展有着密切的联系 高甲基化 抑癌基因沉默 低甲基化 原癌基因被激活 CpG岛 在肿瘤细胞中，抑癌基因启动子区域的CpG岛处于高甲基化状态，因而抑癌基因沉默，使得细胞脱离正常的细胞周期，进入肿瘤发生过程。 原癌基因激活 正常细胞中，由于甲基化作用原癌基因多处于沉默状态，但在多种肿瘤细胞中，均发现原癌基因处于低甲基化状态，并且低甲基化状态与其蛋白表达升高密切相关，表明低甲基化状态可使原癌基因激活。 肿瘤细胞的特性： 现在认为，肿瘤细胞具有以下特征: 1.逃避细胞死亡(resisting cell death) 2.对生长抑制信号不敏感( evading growth suppressors ) 3.诱导新血管生成(inducing angiogenesis) 4.无限的复制潜能(enablingreplicative immortality) 5.组织浸润和转移(activatinginvasion and metastasis) 6.持续的增殖信号(sustainingproliferative signaling) 另外，近年的研究又提出了新的两点:能量代谢的改变(reprogramming of energymetabolism)和逃避免疫系统的破坏(evading immune destruction) 以上几点在细胞发生癌变的过程中有着重要的意义.近年来的研究发现，特定基因的DNA高甲基化在这些过程中均发挥重要作用. 1.逃避细胞死亡 通常情况下，细胞在接触抑制、辐射、凋亡信号分子等刺激时会发生凋亡，但是癌细胞却可以不受凋亡的控制，而大量分裂增殖. 例如，p53基因是一个重要的抑癌基因，可以促使损伤细胞发生凋亡.50%的癌症中存在p53基因的突变失活. p53基因编码区的甲基化状态容易因为脱氨基作用发生5mC-T的转换.同时，INK4a/ARF基因启动子区域的甲基化可以使表达下降，导致原来受抑制的MDM2表达上升，MDM2进而结合p53并使后者发生蛋白质水平的降解，使细胞逃避p53引起的凋亡圈. DNA高甲基化与癌症 表观遗传学与DNA甲基化 DNA甲基化的检测手段 DNA甲基化与癌症 一、表观遗传学与DNA甲基化 基因型相同 现象1： 一个生物体的不同组织基因表达模式截然不同 表达模式迥异 现象2：同卵双生的孪生子具有完全相同的基因组。但他们往往在长大成人后在性格、健康方面往往存在很大差异。 现象3： 肿瘤抑制基因被过量地甲基化而导致失去活性，而基因的DNA序列并不发生变化。 现象4：橘生淮南则为橘，生于淮北则为枳，叶徒相似，其实味不同。同一种水果，在不同产地生长，其味道，大小，外观可能相差很远。 Basket ball player？ Singer？ President？ TV host？ 如果他们出生在不同的地方… 基因 环境 表型 表观遗传学 相同的基因型 不同的表型 ? 什么是表观遗传学？ 表观遗传学： 基因序列无变化 基因功能发生变化 可遗传并且是可逆的 表观遗传学机制： DNA甲基化 组蛋白修饰 RNA调控（RNA干扰，microRNA, long non-coding RNA等) 表观遗传学/Epigenetics 基因型不变的情况下，