实验设计 钙离子对心脏节律性的影响.docVIP

钙离子对心脏节律性的影响 【目的和原理】心脏的正常节律性活动必须在适宜的理化环境下才能维持，一旦适宜的理化环境被干扰或破坏，心脏活动就会受到影响。心脏自动节律性是指心肌细胞能在没有外来刺激情况下具有自动发生节律性兴奋的能力或特性。因心脏具有自动产生节律性收缩的特性，即自动节律性，故在心脏离体后，如用人工灌流方法，可保证其新陈代谢的顺利进行，而心脏仍能有节律地自动收缩和舒张，并可维持较长的时间。离体心脏活动所需的条件应与动物内环境的理化性质保持基本相近，因此改变灌流液的理化因素，则可引起心脏活动的变化。故可以采用离体心脏灌流的方法来研究心脏活动的规律、特点及影响因素。 细胞外钙离子浓度发生变化时，细胞与钙离子内流与钠离子内流相关的生物电活动都将受到影响。当细胞外钙离子浓度在一定范围内升高，细胞外钙离子内流速度增加，引起窦房结P细胞4期自动去极化速度加快，导致P细胞自律性增强，心肌收缩增强增快，心跳加速，即心率加快，同时细胞外高钙时细胞膜钙离子通透性升高，心室肌平台期钙离子内流增加，心肌收缩增强增快；当细胞外钙离子浓度较高时，使得肌浆中的钙离子浓度不断升高，钙离子与肌钙蛋白结合数量不断增加，甚至达到只结合不解离的程度，于是，心脏会停止在收缩状态，心肌出现钙僵直。 用理化特性近似于蟾蜍血浆的任试液灌流离体的蟾蜍心脏，在一定时间内可保持其节律性收缩和舒张。改变灌流液的组成成分，心脏跳动的频率和幅度会随之发生改变。 本实验的目的在于：观察不同浓度的钙离子对心脏活动的影响。 【实验对象】蟾蜍4支 【实验器材和药品】蛙类手术器械一套。生物信号采集系统，张力换能器，铁支架，双凹夹，试管夹，蛙心插管，蛙心夹，滴管，丝线。任氏液，含不同Ca2+浓度的溶液。 【实验步骤和观察项目】 离体蛙心的制备 1、取蟾蜍一只，用探针捣毁脑和脊髓，将其仰卧固定在蛙板上。用镊子夹起皮肤，然后将胸部剑突软骨下方的皮肤剪出一个“V”字形切口，暴露出剑突。用镊子夹住剑突下端，在肌肉层上剪出“V”形切口。再用粗剪刀沿正中线剪开胸骨，并把左右两侧胸骨完全剪掉，眼科剪仔细剪开心包膜，暴露心脏。 2、仔细识别心房、心室、动脉圆锥、主动脉、静脉窦、前后腔静脉等。 3、结扎血管 在右主动脉下穿一根线并结扎，再在左右主动脉下穿一根线备用。用玻璃分针将心尖向上翻至背面，以备用线将前后腔静脉一起结扎（注意勿结扎住静脉窦）。将心脏回复至原位。 4、蛙心插管 在左主动脉下穿一根线结扎左主动脉远心端，另一线备用。提起左主动脉远端缚线，用眼科剪在左主动脉上靠近动脉圆锥处剪一“V”形切口，将盛有少量任试液的蛙心插管由此口插入主动脉，插至动脉圆锥时，略向后退，在心室收缩时，沿心室后壁方向下插，经主动脉瓣插入心室腔内（不可插入过深，以免心室壁堵住插管下口）。若插管成功进入心室，管内液体会随着心室搏动而上下移动。用左主动脉近心端的备用线结扎插管，并将结扎线固定于插管侧面的小突起上。 5、游离蛙心 提起插管，在结扎线远端分别剪断主动脉左右分支；剪断左右肺动脉和前后腔静脉，将心脏离体。用滴管吸尽插管内的余血，加入新鲜任试液反复冲洗数次，直至液体完全澄清。保持灌流液面高度恒定（1~2cm），即可进行试验。 6、仪器连接 用试管夹将制备好的离体蛙心固定于支架上，在心脏舒张期用蛙心夹夹住心尖部，并连接到张力换能器上（勿让心脏受到过度牵拉）。将张力换能器的输出线与生物信号采集系统相连。 二、观察项目 （一）描记正常蛙心收缩曲线 曲线的疏密：代表心跳的频率。 曲线的规律：代表心脏搏动的节律性。 曲线的幅度：代表心室收缩的强弱。 曲线的顶点水平：代表心室收缩的程度。 曲线的基线：代表心室舒张的程度。 （二）不同浓度钙离子对心脏节律性的影响 不同浓度Ca2+对心脏节律性的影响 eq \o\ac(○,1)取1只蟾蜍，离体蛙心并套管，在管内注入标准任氏液，观察并记录心脏在仅有任氏液时的心搏曲线变化 eq \o\ac(○,2)吸出插管内全部任氏液，用不含Ca2+的而其他离子与标准任氏液相同的任氏液换洗数次，至心跳曲线稳定，吸出插管内全部任氏液，换入配置好的不含 Ca2+的而其他离子与标准任氏液相同的任氏液，观察并记录心搏曲线变化 eq \o\ac(○,3)吸出插管内全部任氏液，用标准任氏液换洗数次，至心跳曲线稳定，吸出插管内全部任氏液，换入配置好的1/8倍Ca2+离子浓度的任氏液，观察心搏曲线变化 eq \o\ac(○,4)吸出插管内全部任氏液，用标准任氏液换洗数次，至心跳曲线稳定，吸出插管内全部任氏液，换入配置好的1/4倍Ca2+离子浓度的任氏液，观察心搏曲线变化 eq \o\ac(○,5)吸出插管内全部任氏液，用标准任氏液换洗数次，至心跳曲线稳定，吸出插管内全部任氏液，换入配置好的1/2倍Ca2+离