小鼠基因型鉴定说明书Mouse Genotyping.pdfVIP

One Step Mouse Genotyping Kit PD101-01 Vazyme biotech co., ltd. 产品简介 本试剂盒包含整套的DNA粗提取以及PCR扩增体系，可用于小鼠基因型快速鉴定(Rapid Genotyping)。该试剂盒可用于从 小鼠尾巴、耳朵以及脚趾等组织快速提取基因组DNA，提取产物可直接进行PCR扩增，无需匀浆、破碎、过夜消化、酚氯 仿抽提、DNA沉淀或柱式纯化等操作，极大缩短了实验耗时。使用时，将组织浸泡在预添加了Proteinase K的裂解液中， o o 55 C孵育20 min再95 C加热5 min灭活Proteinase K。裂解产物经离心后可直接用做PCR扩增模板，经反复测试广泛适用于 2 kb以内目标片段扩增，并适用于4对引物以内的多重PCR反应。 试剂盒中配有2 × Taq Plus Master Mix (Dye Plus)(P212)，包含高性能的Taq Plus DNA Polymerase ，dNTP以及优化的缓 冲体系。PCR反应时只需加入引物和模板即可进行扩增，减少了开管/移液等操作，显著降低了样品交叉污染并且提高了检 测通量和结果的重现性。独特的保护剂使得Taq Plus Master Mix经过反复冻融后仍可保持稳定的活性。体系中预混有电泳 缓冲液和染料，可在反应结束后直接进行电泳，使用方便快捷。PCR产物的3’端带A ，可克隆至T载体，并适用于 ClonExpressTM快速克隆试剂盒(C112/C113)。 应用范围 小鼠基因分型 小鼠转基因检测 小鼠基因敲除分析 产品组成 组 分 PD101-01 200 rxn 1 × Mouse tissue Lysis Buffer 40 ml Proteinase K 800 μl 2 × Taq Plus Master Mix (Dye Plus) 5 ml MgCl2 (25mM) 500 μl 5 × PCR Enhancer 2 ml 储存条件 o o 1 × Mouse tissue Lysis Buffer 4 C保存；其余组分-20 C保存。保质期为半年。 质量控制 50 μl PCR反应体系中，以2 μl小鼠尾巴裂解产物为模板，扩增小鼠基因组p53 gene。35个循环后将1/10 PCR产物进行1 % 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，可见有单一的2 kb条带。 应用实例 操作注意事项： 用70%的乙醇(自备)预先清洗组织分离过程中所使用的所有工具； o Proteinase K灭活步骤(95 C，5min)必须进行，其残留活性会抑制后续PCR反应； PCR反应体系配制过程应于冰水浴中进行，以提高扩增特异性(热启动)。 1. DNA提取 推荐组织使用量 - 3～5 mm 小鼠尾尖 2 - 5～10 mm 小鼠耳朵 - 1～2个小鼠脚趾 1.1. 根据需要裂解样品数量配制适量1×裂解液，单个样品所需裂解液配制方法如下： 1 × 裂解液(单样品） Proteinase 4 μl 1 × Mouse tissue Lysis Buffer 200 μl 注意：应使用新鲜配制的1×裂解液；各组分添加完成后请涡旋震荡，充分混匀后再使用。 南京诺唯赞生物科技有限公司 江苏省南京市玄武区双拜巷78号 电话 86-25 传真 86-25 网址 Vazyme Biotech Co., Ltd Add/No.78 Shuangbaix