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标记物的放射化学纯度测定 【目的】 1、了解放射化学纯度的实际含义。 2、熟悉常用而简便的放化纯度测定法——纸层析法的一般方法。 【材料】 1、试剂 ①3H-胸腺嘧啶核苷 370 KBq ②胸腺嘧啶核苷 10 μg ③醋酸乙酯 120 ml ④甲酸乙酯 10 ml ⑤半胱氨酸盐酸盐 0.5克 ⑥3N硫酸 100 ml ⑦0.4%PPO-二甲苯闪烁液 100 ml 2、器材 ①层析缸 1个 ②微量注射器（10 μl） 1只 ③Whatman#4滤纸 5×20 cm ④座标纸（方格） 1张 ⑤剪刀 1个 ⑥喉头喷雾器 1个 ⑦闪烁瓶 20个 ⑧镊子 2把 ⑨立柱铁架 1个 ⑩液体闪烁计数器 1台 【操作步骤】 1、裁取Whatman4#滤纸5×20 cm 1张。用铅笔按1 cm 原点 2、点样 用微量注射器吸取3H-胸腺嘧啶核苷和未标记胸腺嘧啶核苷按各2～3 μl点在原点处。 3、展开 采用上行法，先在层析缸内加入展开剂（本展开剂配方：醋酸乙酯：甲酸：水=60∶5∶35） 50 ml，盖好层析缸盖后待缸内空气为展开剂饱和后（约5分钟），将已点样滤纸悬于缸中，并使展开剂的液面浸在点样基线下1厘米处，开始计算时间，约120分钟后，展开剂前缘达到滤纸上端18 cm处。 4、层析谱的放射性分布测量 展开完毕后，取出滤纸条，吹干，将滤纸从中线剪开成两条，将有放射性的纸条从原点后1 cm处到展开剂前缘1 cm处按划线剪开成小窄条，按顺序将窄纸条放入闪烁瓶底部。加入0.4% PPO闪烁液5 ml 5、显色 将含胸腺嘧啶核苷的另一纸条挂立，用喷雾器将半胱氨酸盐酸盐硫酸溶液喷在纸上，在75℃烘5分钟，胸腺嘧啶斑点呈粉红色。 6、绘制层析谱图 在方格座标纸上，以放射性（cpm）为纵座标，离原点距离为为横座标，绘出层析谱图。 【放射化学纯度计算】 以显色斑点对应的放射性峰的总cpm被整个纸条总cpm除，可求得百分率，即放射化学纯度。 放射化学纯度（%）= 【比移值（Rf）计算】 量出原点至层析斑点（或放射性高峰点）的距离（dc）及原点至展开前缘的距离（ds） Rf = 【测定仪器计数效率】 任取一样品管加入3H-正烷标准源10 μl，再放入液闪计数仪器内测定cpm数。 计数效率=