基因工程技术生产重组蛋白教案资料.pptVIP

利用基因工程技术生产重组蛋白;从基因到蛋白的复制、转录和翻译过程 ;什么是基因工程;什么是重组蛋白; 重组蛋白的生产包括 上游技术和下游技术两大组成部分。上游技术指的是外源基因重组、克隆和表达载体以及基因工程菌（细胞）的设计与构建；而下游技术则涉及到含有重组外源基因的生物细胞（基因工程菌或细胞）的大规模培养以及外源基因表达的重组蛋白的分离纯化过程。;; 重组蛋白的整个过程由工程菌(细胞)的设计构建（上游技术）和基因产物（重组蛋白）的生产（下游技术）两大部分组成，前者的单元操作过程如下: (1) 从供体细胞中分离出基因组DNA，用限制性核酸内切酶分别将外源DNA(包括外源基因或目的基因)和载体分子切开(简称切); (2) 用DNA连接酶将含有外源基因的DNA片段接到载体分子上，形成DNA重组分子(简称接); (3) 借助于细胞转化手段将DNA重组分子导入受体细胞中(简称转); (4) 短时间培养转化细胞，以扩增DNA重组分子或使其整合到受体细胞的基因组中(简称增); (5) 筛选和鉴定转化细胞，获得使外源基因高效稳定表达的基因工程菌或细胞(简称检)。 由此可见，基因工程的上游操作过程可简化为:切、接、转、增、检。;The DNA containing the gene must be isolated away from its genomic context That should be simple – but there are big problems ;;重组蛋白表达的典型穿梭载体。 MCS = 多克隆位点； Op = 细菌复制起始位点； Mp = 细菌中的选择性基因； ME = 真核生物中的选择性基因； OE = 真核复制起始位点； PE = 真核启动子； TE = 真核中止子； hG = 表达的外源基因。;重组蛋白的表达系统;1、原核生物表达系统细菌 (E. coli.);2、真核生物表达系统酵母菌(Yeast);3、动物细胞;4、昆虫细胞;4、新型真核表达系统盘基网柄菌;盘基网柄菌的生命周期;;吞噬细胞 (Phagocytosis）;细胞聚集 (Aggregation);;移动阶段 (Migration phase);顶点 （Culmination）;植物体形成;不同表达系统的比较;重组基因工程菌的高密度培养;碳源种类的选择;基因工程菌培养技术;流加培养;;基因工程菌的固定化培养;固定化培养基因工程菌细胞;载体表面和内部的细胞固定化电镜扫描照片;生物微胶囊固定化;;;重组蛋白的分离纯化（下游技术） 生化分离工作的一般过程;重组蛋白的分离纯化（下游技术）;吸附（色谱）分离技术 活性炭 氧化铝 硅胶 滑石粉 硅藻土 大网格聚合物吸附;固相析出分离法 盐析法 有机溶剂沉淀法 等电点沉淀 其它沉淀法 ? 水溶性非离子型聚合物沉淀剂 ? 金属离子和络合物沉淀 ?离子型多聚物沉淀剂 ?亲和沉淀 结晶法;重组蛋白的色谱分离法 凝胶色谱/分子筛色谱 离子交换 亲和层析 电色谱;电泳分离技术 平板电泳 连续凝胶电泳 等电聚焦点用 毛细管电泳 连续流动电用 无载体连续流动电泳;