木本植物基因组DNA提取方法的对比研究开题报告.docVIP

1.选题依据 1.1 论文题目及研究领域 1.1.1 论文题目: 木本植物基因组ＤＮＡ提取方法的对比研究 1.1.2 研究领域: 木本植物DNA的提取研究 1.2 论文研究的理论意义和应用价值 DNA是遗传信息的载体,是最重要的生物信息分子,是分子生物学研究的主要对象,因此DNA的提取也应是分子生物学实验技术中的最重要、最基本的操作，如不能有效的完成DNA提取方面的工作，那就根本谈不上进行分子生物学方面的实验。植物DNA的提取和纯化是植物基因工程研究的基础操作，实施分子标记，基因文库的构建，基因分离及遗传转化和鉴定等都是以提取DNA为前提。如何简捷高效地提取到纯净、合格的DNA分子，一直是植物生物学者关注的问题。 随着DNA分子标记技术和重组DNA技术的发展，制备完整、纯度较高的基因组DNA日益显得重要。我们在进行木本植物DNA水平遗传多样性研究时，首先遇到的问题是如何快速获得较完整、纯度较高的基因组DNA。由于植物细胞与动物细胞不同，具有一层坚硬的细胞壁，且含有较多的多糖、色素、脂质和多酚等物质，给植物DNA提取带来很多困难，特别是多糖和多酚类物质不易与DNA分开。相对于草本植物，多年生木本植物的次生代谢类物质含量更高，高质量的DNA提取难度更大[1]。 大多数植物DNA提取方法所提取得到的DNA粗提物中往往含有大量RNA、蛋白质、多糖、单宁和色素等杂质，这些杂质有时很难从DNA中除去，大多数蛋白质可通过酚-氯仿-异戊醇处理后变性、沉淀除去，绝大部分RNA可通过经RNase 处理后除去。但大多数木本植物富含多糖、多酚类物质，DNA常受到严重的多酚污染，造成DNA沉淀物难以溶解或溶液色深；多糖污染直接影响基因组DNA的限制性核酸内切酶的酶切效果。多酚类、多糖物质的污染会造成AFLP酶切连接等后续实验效果差，甚至后续PCR没有扩增产物[2]。在大多数木本植物基因组DNA的提取方法中，SDS法和CTAB法是目前最为常用的两种方法。 本试验以细胞生物学研究为基础，以如何获取高质量、高纯度DNA为目的，比较CTAB法和SDS法红豆杉和银杏基因组DNA的提取效果，对两种方法提取的DNA进行琼脂糖凝胶电泳分析和紫外吸收分析，分别对两种方法所提取的红豆杉和银杏基因组DNA的效率和质量进行分析，从中选出一种更适合木本植物基因组DNA的提取方法。 1.3 DNA提取研究概况和发展趋势 Avery在1944年的研究报告中写道：“当溶液中酒精的体积达到9/10时，有纤维状物质析出。如稍加搅拌，它就会象棉线在线轴上一样绕在硬棒上，溶液中的其它成份则呈颗粒状沉淀。溶解纤维状物质并重复数次，可提高其纯度。这一物质具有很强的生物学活性，初步实验证实，它很可能就是DNA（谁能想到！）”。对DNA分子的物理化学研究导致了现代生物学翻天覆地的革命，这更是Avery所没有想到。 Fricdrich Miescher ,瑞士生物学家，有机化学家。1868年医学毕业以后，在著名的有机化学家Hoppe-Seyle的实验室以脓细胞为材料，研究淋巴细胞的组成。1869年他从脓细胞的细胞核中分离出含有大量磷的“核素”即是DNA,是人类第一次真正提取的的DNA。 50 年代初,DNA被证明是所有生物最主要的遗传物质。随着生物化学、分子生物学、遗传学的发展,基因工程和生物技术的创立,DNA的有关技术也得到了飞速发展。DNA提取方法成了这些研究和应用中最重要的技术之一。目前已经建立了用于各种不同目的的DNA提取方法,这些方法也被用于生物学,尤其是生物工程的各个方面。但是,对于不同的植物样品,由于其组织成分的差异,采取的DNA 提取方法不完全一致。 2 .文献综述 2.1 南方红豆杉概况 红豆杉属(Taxus L．)植物属红豆杉科，为常绿乔木或灌木。红豆杉(Taxus mairei)又名紫杉、赤柏松，是第三世纪孑遗植物，被称为植物王国里的“活化石”，因其资源稀少，被列为世界珍稀树种加以保护，在我国为珍稀濒危物种。在几千万年的历史长河中，红豆杉是历经强度阳光、低薄空气、高温干旱、严寒冰川等地球气候巨变的考验，演化遗留下来的物种。其树体极大的适应存活能力所具有的各种生物石碱、化合物，既是本身生存的需要，也是现在被人类认识和开发的珍稀贵重药物。南方红豆杉广泛分布福建、浙江、安徽、江西、湖南、湖北、四川等省，生于海拔1300米以下，喜湿润的微酸性粘质土壤，多生长在山的中下部及沟谷旁，常与刺栲、丝栗栲、甜槠、木荷、杜英、枫香、杉木等混生。 2.2 南方红豆杉的化学组分 根据国家标准共测定我国南方红豆杉的平均化学指标分别为(10项): 原料含水率7.94﹪ 、冷水抽提物0.385﹪、热水抽提物0.765 ﹪ 、乙醚抽出物2.855﹪、NAOH抽出物12.17 ﹪ 、苯醇抽出物1.39