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木聚糖酶分子的结构区 木聚糖酶分子的结构区域 刘瑞田 曲音波 ( 山东大学微生物技术国家重点实验室 济南 250100) 摘要 多数木聚糖酶分子中含有多个功能区域, 这些区域包括催化区、纤维素结合 区、木聚糖结合区、连接序列、重复序列、热稳定区、C e llu lo som e2D o ck in g 区及其它未知功 能的非催化区, 它们担负着不同的生物功能, 不同来源的木聚糖酶分子的功能区域之间同 源性或高或低。 关键词 木聚糖酶 分子结构 功能区域 木聚糖是由 Β2D 21, 4 木糖苷键连接起来的 并带有多种取代基的多聚糖, 它的含量极为丰 富, 是一种巨大的生物质资源, 降解木聚糖的酶 主要为 Β2D 21, 4 内切木聚糖酶 ( 以下简称为木 聚糖酶)。近年来, 木聚糖酶在食品、纺织、饲料、 能源工业中都显示了广阔的应用前景。 特别是 在制浆造纸工业中该酶用于纸浆漂白, 能够增 加纸张白度, 改善纸张性能, 降低漂白用化学物 质 的 用 量, 从 而 有 效 减 轻 造 纸 业 对 环 境 的 污 染1 。 因而目前对木聚糖酶的研究已成为各国 科学工作者的研究焦点之一。 纸浆漂白工序的 环境为温度较高的碱性环境, 为了在应用木聚 糖酶漂白时不使工序复杂化, 这就需要木聚糖 酶具有耐热和耐碱的特性 ( 本实验室现正从事 该酶的耐碱机理研究)。虽然已分离出许多可产 生木聚糖酶的菌株, 但这些菌株产生的木聚糖 酶的耐热或耐碱性往往不能令人满意。 随着研 究的深入, 人们希望能够运用蛋白工程的手段 研制出符合人们要求的木聚糖酶, 这就需要对 该酶的蛋白分子结构及结构中的各功能区域有 全面的了解, 通过对分子结构的认识, 也能为木 聚糖酶的作用机理研究及其对纸浆的漂白机理 研究提供理论基础。 参与植物多聚糖类代谢的酶按其一级和四 级结构的同源性分为 35 个不同的组。木聚糖酶 属 第 10、11 组, 即 F 和 G 组。 在 GenB an k、 EM BL 、Sw issPo r t 数据库中有近 80 种木聚糖 酶的序列资料, 其中 F 组和 E 组的木聚糖酶约 各占一半。从生化特性和结构上讲, 两组酶并无 多大关系, 唯一相似的是它们对硬木或软木木 聚糖的水解产物。木聚糖酶有的 只含有单一区 域即催化区, 也有的同时具备催化区和多种非 催化区。 多区域木聚糖酶分子结构中含有纤维 素结合区、木聚糖结合区、连接序列、重复序列、 热 稳 定 区、C e llu lo som e2D o ck in g 区、其 它 未 知 功能的非催化区以及催化区。近年来, 国外对这 些功能区域研究较多进展较快, 兹将木聚糖酶 各功能区域的最新研究结果总结如下: 1 催化区 (Ca ta ly t ic D om a in , CD ) 木聚糖酶的 CD 承担着酶的水解特性, 并 作为该酶分类的基础。F、G 组木聚糖酶在分子 量、净电荷、不带电荷的碱性和酸性氨基酸的比 例等方面都不同。按等电点的不同, G 组中木聚 糖酶可分为高等电点和低等电点两个亚组 ( 其 平均等电点分别为 915 和 510) 2 。木聚糖酶的 氨基酸组成在数量上变化很大, 但其 CD 在大 小上都趋向一致。CD 大都通过与已知区域的 序列相关性的比较鉴定出来。 木聚糖酶与纤维 素酶的 CD 几乎无同源性, 表明两酶是从不同 的祖先进化而来。有些酶含有两个催化区, 如生 黄 瘤 胃 球 菌 ( R um ino co ccu s f lav ifac ien s ) 的 X ynA N 末端含有属于 G 组木聚糖酶的 CD , 而 C 末端含有属于 F 组木聚糖酶的 CD。 产琥珀 前一酶 CBD 的同源性为 67% 和 63% 8 , 因而酸 纤 前一酶 CBD 的同源性为 67% 和 63% 8 , 因而 酸 纤 维 梭 杆 菌 ( F ib ro b acv te r su cc in gen e s) S85 所 产 生 的 分 子 量 为 6614KD a l 木 聚 糖 酶 中 含 A 、B 两催化区域, 两区域具 5615% 的同源性, 且与生黄瘤胃球菌、丙酮丁醇梭菌 (C los t r id ium a ce tobu ty lcum )、短 小 芽 孢 杆 菌 ( B a c il lu s p um ilu s )、枯草杆菌 (B a c il lu s su bt il is)、环状芽 孢 杆菌 (B a c il lu s c ircu la n s ) 等产生的木聚糖酶 具同源性3 。F lin t 等4 还发现了两个由非催化 区的肽链隔开的 CD。 这三者可能同属于一类型。O h t su k