食品大肠菌群的测定（平板计数法）.pptVIP

大肠菌群计数 1:10 1ml 1ml 1:1000 1:100 1ml 1:10000 加入46℃结晶紫中性红胆盐琼脂(VRBA)培养基12~15ml待琼脂凝固后，再加3-4mL培养基覆盖。 VRBA的主要成分 乳糖、胆盐、结晶紫、 中性红及细菌生长所 必需的营养成分如:蛋 白胨、酵母膏等。 结晶紫和中性红为VRBA 的指示剂系统，在酸性条 件下为紫红色。 大肠菌群分解乳糖所 产生的酸与胆盐结合， 可形成沉淀。 25g或ml样品 1ml 生理 盐水 1ml 1ml 1ml 典型菌落为紫红色 , 菌落周围有红色的胆盐沉淀环。菌落直径为0.5mm 或更大。 挑选菌落接种BGLB 实践操作 任务一 仪器试剂准备 任务二 仪器试剂灭菌 任务三 样品稀释制备 ⑴检样处理 以无菌操作取经过充分摇匀的检样25mL，放入含有225mL灭菌生理盐水的灭菌广口瓶内做成1:10的均匀稀释液。 ⑵样品稀释 用1mL灭菌吸管,吸取1:10稀释液1mL,沿管壁徐徐注入含有9mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内（注意吸管尖端不要触及管内稀释液),充分振摇试管，使之混合均匀,制备成1:100的稀释液。另取1mL灭菌吸管,按上项操作顺序，作10倍递增稀释液,如此每递增稀释一次,即换用1支1mL灭菌吸管。 全过程遵循无菌操作程序，考虑如何满足要求？ 任务四 平板制备 选择适宜的稀释样液 根据对标本情况的估计,选择 3个适宜稀释度,吸取该稀释度1mL稀释液于灭菌平皿内。 待培养基冷却至46℃左右，以无菌操作侵入无菌培养皿中。每个平皿倒入约15-20mL培养基，利用培养基冲散菌液，混匀。冷却凝固后，再在表面加3-4mL培养基。 从样品稀释到平板 涂布要求在15min 内 完成。 任务五 典型和可疑菌落计数 选择菌落数在15~150之间的平板，分别计数平板上出现的典型和可疑大肠菌群菌落。 典型菌落为紫红色，菌落周围有胆盐与酸形成的沉淀环，菌落直径为0.5mm或更大。 任务六 证实试验 从VRBA平板上挑取10个不同类型的典型和可疑菌落，分别移种于BGLB肉汤管内，进行证实试验。 BGLB肉汤管产气者，所对应的菌落即为大肠菌群阳性菌落。 任务七 结果报告 经最后证实为大肠菌群阳性的BGLB管的百分比乘以计数的平板菌落数，再乘以稀释倍数，即为每g (mL)样品中大肠菌群数 。 例：10-4样品稀释液1ml在VRBA平板上有100个典型和可疑菌落，挑取10个接种BGLB肉汤，证实6个为阳性。则样品大肠菌群数为： 100×6/10×10-4/g(mL)=6.0×105cfu/g(mL) 注意事项 1、选择稀释度时，应以对含菌量的估计为依据，具体情况所选稀释度不同。 2、两种检测方法的比较 平板计数法相对于MPN法来说，检验结果更精确。 适合用于污染比较严重的样品，但对于污染菌量太少的样品，还是MPN法更有优势。