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第七章 抗体酶 一、抗体酶概述 抗体是和抗原结合的物质。 抗体与靶分子精确匹配。 产生高度特异性和亲和性。 免疫系统可以产生108～1010个不同的抗体分子（多样性 ） 抗体结构 抗体分子是由两条轻链( L链)和两条重链(H链)通过链间二硫键连接而成的四肽链结构。 1969年， Jentcks根据Panling的化学反应过渡态理论预言，用过渡态类似物，作为半抗原，产生的抗体，该抗体具有酶催化反应的基本特征。 1986年《Science》同时发表了两篇来自由Lemer和Schultz分别领导的两个研究组的发现具有酶催化能力的抗体研究报告，揭开研究抗体酶的热潮。 取得的成果： 天然酶所催化的6种酶促反应 数十种类型的常规反应的抗体酶。包括酯、羧酸和酰胺键的水解，酰胺形成，光诱导裂解和聚合，酯交换，等等。 抗体酶（abzyme）：是抗体的高度选择性和酶的高效催化能力巧妙结合的产物，本质上是一类具有催化活力的免疫球蛋白，在其可变区赋予了酶的属性，也叫催化抗体。 特点： 1、反应专一性相当于或超过自然酶反应的专一性， 2、催化速度有的可达到自然酶催化的水平。但一般来说比非催化反应快 102～106倍，比天然酶催化反应速度慢，仅为它的 10-4-10-2。 革命尚未成功，同志仍需努力。 二、抗体酶的制备方法 1. 诱导法 以Pauling的稳定过渡态理论为指导，即酶的催化在于能结合底物产生过渡态，降低能障（反应的活化能）。 以过渡态类似物作为半抗原，诱导与其互补构象的抗体，使其具有催化活性，可观察到抗体催化相应底物发生化学反应。 例 1： Schultz研究小组以羧酸二酯水解反应的 过渡态类似物对硝基苯磷酰胆碱作为半抗原，诱 导产生单克隆抗体，经过筛选找到一株 MOPC167。使水解反应速度加快 12 000倍。 例2： Napper等用一个环化的磷酸酯作为过渡态类似物，得到单克隆抗体24B11 1、可催化外消旋的羟基羧酸酯分子内环化形成内酯； 2、加速反应167倍； 3、产物中一种对映体的含量比另一种高出94％。 这类抗体可用于含有酸或醇功能基的合成中间物的手性拆分，有重要的商业价值。 2.抗体与半抗原互补法 抗体与其配体的相互作用是相当精确的。抗体常含有与配体功能互补的特殊功能基。在开发诱导抗体酶的产生时，一个重要的目标是产生的抗体结合部位的催化基团和半抗原的结合直接相关。 例：Shokat等利用抗体与半抗原之间的电荷互补性制备了针对带正电半抗原的抗体 3.多底物类似物法 很多酶的催化作用要有辅因子参与，辅因子包括金属离子、血红素、硫胺素等。 因此，将辅因子引入抗体结合部位将会扩大抗体催化作用的范围。 用多底物类似物对动物进行一次免疫，可产生既有辅因子结合部位，又有底物结合部位的抗体。 4. 抗体结合部位修饰法 在抗体的抗原结合部位引入催化基团。 方法有两种： （1）选择性化学修饰法 （2）基因工程定点突变法 亲和标记（修饰法的重要一种技术） 1、可裂解亲和试剂与抗体作用；? 2、用二硫苏糖醇（DTT）处理，则在抗体结合部位附近引入巯基； 3、用此巯基作为锚引入其他化学功能基（如咪唑）。 例：使用可裂解亲和标记物将含巯基的柄状亲核基团引入到抗2，4-二硝基苯酚（DNP）的单抗的抗原结合位点，得到的抗体酶对含有(DNP)与香豆素的羧酸酯的水解反应的催化效率比二硫苏糖醇高104倍。 基因工程定点突变法 通过基因工程，精确地将催化基团引入到抗体的结合部位上。 例：Schultz小组用此法将催化基团组氨酸插入到对二硝基苯专一的抗体（MOPC315）的结合部位。合成了VL片断的基因，其中抗体结合部位的Tyr34被组氨酸取代,然后用大肠杆菌表达重组的VL,再将VL链与天然的VH链组合在一起，则得到具有显著酯解活力的抗体酶。 5. 抗体库法 即用基因克隆技术将全套抗体重链和轻链可变区基因克隆出来,重组到原核表达载体，通过大肠杆菌直接表达有功能的抗体分子片断，从中筛选特异性的可变区基因。 三、抗体酶的应用 在抗体酶被发现的13年以后，他们才开始进入商业领域。目前已有一些公司，比如：美国的Med-Immune 和Prolifaron 公司以及以色列的Advanced Biotech Ltd. 致力于抗体酶的商业应用，并