DNA测序技术的原理、发展及在医学中的应用.pptVIP

双脱氧链末端合成终止法 测序酶（sequenase） 测序酶是一种经过修饰的T7噬菌体DNA聚合酶，消除了3′→5′外切酶活性。该酶活性非常稳定，具有很高的链延伸能力和极快的聚合反应速度，是测定较长DNA的首选酶。 双脱氧链末端合成终止法 测序产物的凝胶电泳及识读 能否将测序反应中产生的各种不同长度的DNA片段进行有效分离是序列分析成败的关键。 最早采用放射性标记引物，后来采用荧光剂标记。 DNA序列分析的自动化 激光测序法终止标记系统是用4种不同的荧光染料标记不同的ddNTP。 ?测序反应可以在同一反应管内进行，不必分成4管，反应产物按终止位置的碱基不同其3′末端带有不同的荧光基团，被激发后产生不同的荧光，将反应产物加样于凝胶的同一加样孔，电泳分离后，经过DNA测序仪分析系统识别，将检测将信号不断传送到计算机，通过软件分析，自动读出待测DNA的全部核苷酸序列 。 DNA序列分析的自动化 DNA序列分析的自动化 毛细管电泳? 毛细管电泳（Capillary electrophoresis, CE）是以高压直流电场为驱动力，在毛细管内使荷电粒子按淌度或分配系数进行分离的一种电泳技术。 ?具有分辨率高、重现性好、灵敏度高、快速和易于实现自动化等优点 Maxam-Gilbert DNA 化学降解法 基本原理：直接或间接特异性识别4 种碱基 特定化学试剂可对碱基进行特异性修饰