生物化学 第40章 基因工程和蛋白质工程.pptVIP

第40章 基因工程和蛋白质工程 Genetic enaineering Protion engineering 目的基因的获取 1）化学合成法 要求：已知目的基因的核苷酸序列或其产物的氨基酸序列。 2）基因组DNA文库(genomic DNA library) 3）cDNA文库(cDNA library) 4）聚合酶链反应 (polymerase chain reaction，PCR) 二、基因的分离合成和测序 1、基因文库的构建 2、cDNA文库的构建 3、克隆基因的分离与鉴定 4、PCR扩增基因 5、DNA的化学合成 6、基因定位诱变 7、DNA序列的测定 三、克隆基因的表达 基因表达的调控元件 非融合蛋白和融合蛋白的表达 外源基因在真核细胞中的表达 四、蛋白质工程 本部分内容自学 了解DNA克隆的基本原理，了解基因的分离合成和测序、克隆基因的表达 了解蛋白质工程的研究内容及其意义 了解基因工程的应用与展望 2、外源基因与载体的连接 1）粘性末端连接 方式：同一限制酶切位点连接 不同限制酶切位点连接 配伍末端连接 非配伍末端连接 Bam HⅠ切割反应 GGATCC CCTAGG T4 DNA连接酶 15oC GATCC G G CCTAG + 目的基因用 Bam HⅠ切割 载体DNA用Bam HⅠ切割 重组体 载体自连 目的基因自连 同一限制酶切位点