用同源重组法将人肝金属硫蛋白突变体!基因.pdfVIP

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2019-11-01 发布于湖北
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用同源重组法将人肝金属硫蛋白突变体!基因.pdf

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植物学报，（）： $$! I$ (’’ ‘ $ +%), -’),#*%, !*#*%, 用同源重组法将人肝金属硫蛋白突变体基因 !! 整合在集胞藻!#$ 中表达， ! ! ! ! ! 宋凌云施定基宁叶罗娜邵宁俞梅敏茹炳根（北京大学生命科学学院，北京；中国科学院植物研究所，北京） !# !$$%! # !$$$’( 摘要：将集胞藻（）上的一段序列（从到）插入的多 !#$%’%()*( )* # +,, -%$( +(,- . -’( /* . 0-( /* *1234)567*8 9: 克隆位点，构建带有整合平台的载体 *9:1。再将人工合成的基因插入中间载体*;=(’ 上启动子+*)/? 的下 !! 游，并将*;= 上+*)/? 和基因插入*9:1 构建成整合表达载体*9:1= 。利用自然转化将整合表达载体导入 !! !! !! 集胞藻-%$(，并通过单交换同源重组使基因整合到集胞藻-%$( 基因组@A? 上。逐步提高氨苄青霉素浓度，筛 !! 选得到遗传性状稳定的转基因集胞藻。检测转基因集胞藻，结果证实基因已整合到集胞藻 -%$( +,; -%$( !! -%$( 的染色体上；结果表明，基因在转基因集胞藻细胞中得到表达，测定表明在 B4)846C /2D887CE -%$( FG:? 0$ HD2I !! ! 的JC K 诱导下在新鲜集胞藻-%$( 中的蛋白表达量为$ # (’ HEI E；重金属耐受性实验表明，得到能耐受,3 K 的 !! 转基因集胞藻。经原子吸收光谱法测定，转基因集胞藻在含低浓度 K （）的培养液中对 K -%$( -%$( ,3 !$ HD2I ,3 ! 的去