遗传实验报告4_小鼠骨髓染色体.docx

遗传学基础实验报告No.4 PAGE 4 小鼠骨髓细胞染色体标本的制备和观察 实验日期：2013年4月11日 实验目的 了解利用动物骨髓进行细胞染色体制片的一般方法，比较与其他制片方法的区别。正确掌握细胞收集、低渗、滴片等技术手段。观察和了解小鼠染色体的数目及形态特征。利用显微照相技术对所得切片进行照相。 实验原理 染色体的数目及形态特征在一个物种内是相对稳定的，染色体上的基因决定了一个物种生长发育的全部信息。因此通过染色体分析，可以了解某一物种最基本的遗传指标。而制备优良的细胞学标本是进一步开展染色体分带、组型分析和原位杂交的前提。 进行染色体标本的制备一般取自细胞分裂旺盛的组织，如骨髓、淋巴细胞以及通过人工培养的悬浮液。如将秋水仙素注射到动物的腹腔内，经肠系膜吸收并可转运到骨髓，结果使正在分裂的细胞不能形成纺锤体，使得染色体停在中期状态，经过处理和制片后就可以清楚地观察到染色体。这种制片方法虽然爷经过许多步骤，但是效果非常好。而且省去了细胞培养的阶段，可以获得大量分裂细胞。但这种制片方法是属于侵害性的，因此这种方法适用于动物来源丰富、动物个体较小的材料。对于大型动物可以采取骨髓穿刺术获得红骨髓，在临床上用于一些血液疾病的研究分析。对于一些珍稀的鸟类可采用羽髓来制片，方法基本一样。人类的染色体分析可采用外周血培养的方法来获得大量的细胞材料。 实验材料及仪器 实验材料：体重20克左右的小鼠一只 实验仪器：恒温水浴槽、镊子、解剖盘、解剖剪、镊子、注射器、离心机、镜头纸、光学显微镜、带数码相机的光学显微镜、0.075mKCl低渗液、固定液（甲醇：醋酸＝3:1）、4.0g/L秋水仙素溶液、改良苯酚品红溶液 实验方法及步骤 腹腔注射秋水仙素溶液：在做实验前2~3小时，对实验用小鼠按0.1ml/20g小鼠的量对其进行4.0g/L的秋水仙素注射，也可以时间更长或过夜。 取材：将处理后的小鼠放到解剖盘上，用断颈法迅速将小鼠处死。解剖后将其股骨取出，将附着在股骨上的肉剥离干净，然后用纸擦净。用解剖剪将股骨头剪开，暴露出骨髓腔。用注射器吸取在37℃下保温的低渗液2毫升，将针头插入骨髓腔中冲洗骨髓，使冲洗液从股骨的另一端流出。收集冲洗液到5ml刻度的离心管中。同组两人将两条股骨的骨髓吹到同一离心管里，最终使冲洗液达到4mL。 低渗：用吸管将冲洗液吹打几次，然后把离心管放在37℃恒温水浴锅内低渗20min。 固定：低渗结束后将离心管取出，加入2ml的固定液，用吸管吹打均匀后放入37℃恒温水浴锅内固定10min。 离心：将离心管配平后，放到离心机的对称位置上。1500rpm离心10min。 再固定：离心结束后，弃掉离心管中的上清液，加入新配制的固定液1ml，用吸管吹打均匀后，再放入恒温水浴锅继续固定10min。 离心：配平离心管后，在1500rpm转速的条件下离心10min。 制备细胞悬液：离心结束弃上清，最后留大约与沉淀等量的上清液，用吸管吹打成细胞悬液。 滴片：从冰盒内取出预冷的载玻片，将4片载玻片并排摆在柜子脚的边缘。将细胞悬液吸入吸管内，手持吸管在载玻片正上方柜子顶端处向下滴片。每张载玻片上滴3滴。 干燥：在室温下将载玻片自然晾干。 染色：在载玻片的正面用记号笔写明编号，用改良苯酚品红溶液染色10min。 去浮色：染色结束后用清水将染料轻轻冲去，然后在室温下自然晾干。 镜检：先用低倍镜找到一好的分裂相区域，然后转用高倍镜进行详细的观察。 观察和照相：用油镜观察，并选取良好的视野照相。 实验结果及分析 实验结果：使用的机器为1号机。在考试的10分钟内拍摄了3张照片。 小鼠骨髓染色体 图一 经秋水仙素处理的小鼠骨髓细胞染色体（M=100*10） （此图使用了Adobe Photoshop CS5 调节了亮度及对比度） 实验结果分析： 在油镜下可以看到被从细胞核中摔出的染色体，细胞膜已经破裂，在图示黄色方框下方染色体有部分交叉和重叠，可判断染色体数目为30+。 优点：就制片而言，染色程度比较好，为这几次实验中染色最理想的一次。要观察的区域很干净，视野中基本没有杂质，旁边的细胞也都较为分散，不影响计数和观察。对于整体来说，我们组的细胞样品和其他几组比较是比较浓的，摔在这几张片子上面的细胞也都比较多。 缺点：照片中的染色体虽然大部分还是可以计数的，但染色体分的还不是很开。考试前在实验室的油镜下观察时，曾经找到了一个非常理想的可以清晰计数的标本，经计数得染色体个数为40，查阅资料发现小鼠染色体数目为40，与结果相符。于是我记录了该点的横纵坐标，为（44.2，102.0）。但在显微照相考试时，发现虽然都是同一品牌（尼康）的机器，但两台显微镜载物台的坐标标尺并不一致，按照之前的坐标对应的并不是同一个区域，在考试的短时间内没有能够成