雪莲果离体培养及植株再生体系的建立.docVIP

?生物技术?北方园艺 2008(7:210~212 第一作者简介:马杰(19602,女,河南开封人,本科,副教授,现从事生物技术研究工作。E 2mail :mjie0924@126.com 。基金项目:河南省科技攻关资助项目(0524050005。收稿日期:2008-02-10 雪莲果离体培养及植株再生体系的建立 马　杰,崔　波,张仙云,袁秀云 (郑州师范高等专科学校生物工程研究所,河南郑州450044 　　摘　要:对雪莲果幼嫩叶片和腋芽离体培养与植株再生过程进行了研究,建立了雪莲果的再 生体系。该体系以雪莲果叶片和腋芽为材料进行离体培养,结果表明:MS 可作为雪莲果再生体系的基本培养基;叶片、腋芽诱导愈伤组织和不定芽培养基为MS +62BA 2.0mg/L +NAA 0.2mg/L +蔗糖3%;继代培养基为MS +62BA 1.0mg/L +NAA 0.1mg/L +蔗糖3%;生根培养基为1/2MS +IAA 0.3mg/L +蔗糖3%。 关键词:雪莲果;离体培养;再生体系中图分类号:Q 943.1　文献标识码:A 　文章编号:1001-0009(200807-0210-03 　　雪莲果S mallanthus sonchi f olius (Poepp .et Endl. H.Robinson 又称菊薯、亚贡,为菊科多年生草本植物。原产南美洲安第斯山脉,果实为块根,形状如甘薯,被称为地下水果。雪莲果叶富含硒和多糖、酚酸、黄酮类等功能性成分,果实含有丰富的寡聚果糖和人体必须氨基酸和酚酸、类黄酮和砧类物质,具有降血脂,减肥,调节内分泌,防治血管老化,预防骨质疏松,抗菌等作用,特别适合糖尿病人和减肥者食用。因其特殊的保健功能及药用价值,越来越得到广泛的重视,在食品、医药方面有广阔的应用前景。随着对雪莲果研究的深入,雪莲果将成为一种极具市场潜力的植物。雪莲果的常规繁殖靠种子或扦插,速度慢,周期长,成本较高。该试验探索了雪莲果再生体系建立的方法和条件,并为该植株开展快繁等进一步的研究奠定了基础。 1　材料和方法 1.1　材料 雪莲果叶片和腋芽。1.2　诱导培养 取雪莲果的幼嫩叶片、腋芽置流水中冲洗15min ,无菌操作以70%酒精进行表面灭菌15s ,用无菌水冲净后,置0.1%升汞溶液中振摇5min ,然后以无菌水冲洗4遍。叶片用无菌解剖刀将周边切下弃去,保留部分切成大小约0.5cm 2,接种于1~4号培养基中(表1,每种培养基接种数均为40。腋芽灭菌后剥离至生长点,接种于1、2号培养基中,统计产生不定芽数。1.3　增殖培养 将诱导形成的不定芽分割成单个芽苗,每瓶接种数一致,转入6、9~13号6种培养基上进行增殖培养(表3, 分别统计数量。 图1　雪莲果的不定芽诱导 1.4　生根培养 将高2~6cm 植株分别放入表4所列的10~13号4种培养基中(表4,每种培养基5瓶,每瓶放7株植株,即每种培养基接种35株,置光照培养箱中培养,15~20d 观察不定根的生长情况。1.5　培养条件及培养基 所有培养条件均为:培养温度(25±2℃,光照强度2500lx ,光照时间每天12h ;所用培养基除特别注明外均为MS 培养基,蔗糖0.3%,琼脂0.8%,p H 值(5.8±0.1。 2　结果 2.1　雪莲果叶片、腋芽不定芽的诱导 叶片在1周左右,开始陆续在其周边出现白色或淡黄色至黄绿色的突起(见图1,其愈伤组织渐渐向外蔓延变大、变厚,之后在其突起处形成3~4或更多不定芽,30d 左右长成10~15mm 的无根小苗。诱导不定芽成 12 北方园艺2008(7:210~212 ?生物技术? 功率最高44.00%(表1。腋芽诱导最初表现为萌动、基部膨大,长出白色或淡黄色愈伤组织,然后形成不定芽。腋芽诱导成功率高,达100%(表2 。 图2　雪莲果的继代培养 　　表1　叶片在MS 培养基诱导不定芽的试验结果 编号激素/mg ?L -1接种数量产生不定芽的外植体数不定芽诱导率/%162BA 1.0+I BA 0.1281035.71262BA 1.0+NAA 0.1251144.003KT 1.0+I BA 0.129620.694 KT 1.0+NAA 0.1 22 5 22.73 　　表2　腋芽在MS 培养基诱导不定芽的试验结果 编号激素/ mg ?L -1 接种数量产生不定芽的外植体数 不定芽诱导率/% 162BA 1.0+I BA 0.1551002 62BA 1.0+NAA 0.1 4 4 100 2.2　不定芽的继代培养 继代培养是实现快繁的重要环节之一,培养一段时 间后,为了防止培养物老化,要及时将其接种到新鲜培养基中,进行继代培养,以使不定芽能够顺利地增殖、生长,从而得到大量幼苗(见图2,供进一步生根试验。继代培养过程中,不定芽基部有