批内重复实验：血清尿素(BU)的测定.pptVIP

血清尿素（BU）的测定 Reagent for Urea Test —— 批内重复试验  吴民泸 2013.12.01 血清尿素（BU）的测定 —— 批内重复试验 Reagent for Urea Test 一、实验原理 二、实验操作 三、计算 四、参考值 五、临床意义 六、方法学评价 七、注意事项 一、实验原理 脲酶水解样品中的尿素，产生二分子氨和一分子二氧化碳。氨在硷性条件下与酚及次氯酸反应，在亚硝基铁氰化钠催化作用下生成蓝色化合物，与经过同样处理的校准液进行比色，即可计算出样品中尿素的含量。 二、主要组成成分 R1 脲酶 120U/L R2 磷酸盐缓冲液（Ph7.0） 50mmol/L R3 亚硝基铁氰化钠 0.16mmol/L R4 次氯酸钠 7.00mmol/L 尿素标准品 7.14mmol/L 三、测定步骤：  四、计算 注：尿素校准液浓度 7.14mmol/L 样品尿素含量（mmol/L）= ×Cs 平均值、标准差、变异系数、离群值。 五、参考值 血清/血浆：2.86 ~ 8.20 mmol/L 六、临床意义 1、增高 ⑴生理性增高：高蛋白饮食引起血清尿素浓度和尿液排出量显著增高。血清尿素浓度男性比女性平均高0.3~0.5 mmol/L，随年龄增加有增高倾向。成人日间生理变异平均为0.63 mmol/L ⑵肾脏疾病：如急性肾衰、慢性肾炎、肾动脉硬化、慢性肾盂肾炎、肾结核、肾肿瘤晚期等；肾功能轻度受损时，BUN可无变化。当60%~70%有效肾单位受损时，BUN才增高。因此BUN测定不能作为早期肾功能受损的指标，但对肾功能衰竭，尤其是尿毒症诊断有特殊价值，并可判断病情，估计预后。根据BUN测定结果可判断肾功能衰竭的程度。 ①肾功能衰竭代偿期：Ccr（内生肌酐清除率，参考值80～100ml/min）下降血Cr正常，BUN 正常或轻度升高（＜9mmol/L）。②肾功能衰竭失代偿期（氮质血症期或尿毒症期）：Ccr明显下降＜0.83 ml/s血Cr增高（＞90），BUN中度升高（＞9 mmol/L）。③尿毒症期：Ccr＜0.33ml/s，血Cr＞445μmol/L，BUN＞20 mmol/L⑶肾前性或肾后性因素引起尿量显著减少或尿闭，如剧烈呕吐、腹泻引起的脱水、水肿、腹循环功能衰竭，以及尿路结石、前列腺肥大、肿瘤等引起的尿路梗阻。 ⑷体内蛋白质分解过多，如大面积烧伤、大手术以后，上消化道出血、甲状腺功能亢进及急性传染病等。此时BUN增高，其它肾功能试验结果大致正常。 2、降低 ⑴生理性多见于婴儿、孕妇以及低蛋白高糖饮食者。 ⑵临床较少见。主要系肝实质受损，生成减少。如肝功能衰竭、急性黄色肝萎缩、肝硬化、中毒性肝炎，严重性贫血等。 六、方法学评价 1、本方法呈色稳定，显色后吸光度波动1h内 0.005、12h内0.01~0.02 2、批内CV≤3.5% 批间相对极差≤ 4.5%； 回收率96.71%~103.35%； 线性范围0~28mmol/L 不准确度≤10% 3、实验中应注意防污染，氨可使检查结果明显 升高；胆红素含量超过34.2umol/L时将使检 查结果降低。 七、注意事项： 1、本法亦可测定尿液中尿素，但尿中的氨比血清中的氨多1000多倍，因而测定尿氨时，氨必须经过校正，可测定用脲酶处理前尿标本中的氨以校正内源性氨。 2、空气中的氨污染试剂或玻璃器皿的污染或使用铵盐抗凝剂可使结果偏高。高浓度氟化物可抑制尿素酶，引起结果假性偏低。 3、样品中BU含量超过28.00 mmol/L，则用生理盐水稀释后测定，结果乘以稀释倍数。 4、反应生成液外观显绿色，是因反应生成蓝色产物与本底黄色混合所致。 * * 混匀以上各管，置37℃水温恒温5分钟。 试剂R4 （ml） 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 混匀，置37℃恒温5分钟，各管加适量蒸馏水后以空白管调零，600nm波长，测定各管吸光度值。 样 品（ml） 0.01 0.01 0.01 0.01