褪黑素合成酶基因转化烟草及转化植株抗氧化系统变化.pdf

生 物 工 程 学 报 Chin J Biotech 2009, July 25; 25(7): 1014-1021 journals.im.ac.cn Chinese Journal of Biotechnology ISSN 1000-3061 cjb@im.ac.cn © 2009 Institute of Microbiology, CAS CSM, All rights reserved 农业生物技术 1 1 1 1 2 2 3 王英娟 , 贾敬芬 , 步怀宇 , 赵宇玮 , 许耀 , Carl Hirschie Johnson , Jan Kolář 1 , 710069 2 Department of Biology, Box 1812-B, Vanderbilt University, Nashville, TN 37235, USA 3 Institute of Experimental Botany, Academy of Sciences of the Czech Republic, Rozvojová 135,165 02 Praha 6, Czech Republic : 通过根癌农杆菌(含植物表达载体 YXu55)介导的转化技术, 将褪黑素生物合成酶- 芳烷基胺 N- 乙酰转移酶 (Arylalkylamine N-acetyltransferase, AANAT)与羟基吲哚O- 甲基转移酶(Hydroxyindole O-methyltransferase, HIOMT)基因 导入到烟草(秦烟95) 中。对所获得的庆大霉素抗性烟草株系进行Southern blotting 和RT-PCR 分子生物学检测, 结果表 明, AANAT-HIOMT 基因已成功地整合到烟草基因组中, 并且可以在 mRNA 水平上进行转录。用反相高效液相色谱法 (RP-HPLC)测定转化株系的褪黑素含量表明, 转 AANAT-HIOMT 基因烟草株系的褪黑素含量均明显高于 pZP122( 不含 AANAT 和HIOMT 基因的空白质粒)转基因株系和未转基因的对照植株, 证明AANAT-HIOMT 基因在转基因植株中的表 达增强了褪黑素的合成能力。对不同株系抗氧化系统的部分指标进行了测定, 并与其亲本对照植株比较, 发现 AANAT-HIOMT 基因在转基因植物中的表达引起超氧化物歧化酶(SOD) 、过氧化物酶(POD) 、过氧化氢酶(CAT)活性增 加, 谷胱甘肽(GSH)浓度以及总抗氧化能力升高, 且没有引起膜脂质过氧化物丙二醛(MDA) 的变化, 说明转基因烟草抗 氧化潜能得到提高。 : 烟草, 褪黑素, 褪黑素合成酶基因, 遗传转化, 抗氧化 Genetic transformation of Nicotiana tabacum L. by Agrobacterium tumefaciens carrying genes in the melatonin biosynthesis pathway and the enhancement of antioxidative capability in transgenic plants 1 1 1