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PAGE PAGE 10 绿色荧光蛋白基因在大肠杆菌里的克隆与表达 摘 要：研究绿色荧光蛋白（Green Fluorescent Protein，GFP）基因的基因克隆及在大肠杆菌中的表达。通过分别将DH-5α (pEGFP-N3),DH-5α(pET-28a)提取质粒、琼脂糖凝胶电泳检测、PCR、双酶切并连接形成重组质粒pET-28a-GFP，将重组质粒导入E.coli DH-5α感受态细胞中进行转化,通过限制性核酸内切酶Not I与Bam H1和PCR对所建质粒进行分析鉴定后, 通过转化的方法把含绿色荧光蛋（GFP）外源基因转入大肠杆菌体BL-21内进行表达，挑取单菌落进行活化诱导，用IPTG诱导GFP基因表达，若在紫外扫描仪下观察可以看到显现绿色，则可判断GFP基因在大肠杆菌中成功表达。结果显示构建的重组质粒pET-28a-GFP在E.coli中成功表达。 关键词：绿色荧光蛋白 质粒重组 克隆 诱导表达 前 言 基因标记技术是近年来发展起来的分子生物学技术。荧光蛋白基因在标记基因方面由于具有独特的优点而引起了科学家的广泛关注，现已被普遍应用到分子生物学研究的各个方面。荧光蛋白是海洋生物体内的一类发光蛋白，分为绿色荧光蛋白、蓝色荧光蛋白、黄色荧光蛋白和红色荧光蛋白。 本实验主要研究的是绿色荧光蛋白(green fluorescent protein, GFP)。绿