化疗药物导细胞凋亡-肿瘤细胞总DNA提取.ppt

病理生理教研室 细胞凋亡是指细胞在一定的生理或病理条件下，受内在遗传机制的控制自动结束生命的过程 细胞凋亡的过程不同于坏死性死亡，其染色质断裂，细胞核碎裂程核裂片，细胞质浓缩，细胞体积减小，细胞膜内折，整个细胞通过起泡和发芽方式形成大小不等凋亡小体。 凋亡的细胞的核DNA的断裂发生在核小体之间，因此产生的断裂DNA在电泳时会呈180-200bp整数倍大小的阶梯状条带，这是识别凋亡细胞的可靠生化特征。能诱导细胞凋亡的枉法有很多，这里主要采取化疗药物诱导细胞凋亡 HepG2 肝癌细胞株，DNA提取试剂盒，移液器，EP管，PBS，低温离心机 在细胞悬液中加入20 μl Proteinase K溶液，混匀。 加入200 μl缓冲液GB，充分颠倒混匀，70℃放置10 min，溶液应变清亮，简短离心以去除水珠。 加人200 μl 无水乙醇，充分振荡混匀15 sec，此时可能会出现絮状沉淀，简短离心以去除管盖内壁的水珠。 将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱CB3中（吸附柱放入收集管中），12,000 rpm (~13,400×g)离心30 sec，倒掉废液，将吸附柱CB3放回收集管中。 向吸附柱CB3中加入500 μl缓冲液GD （使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm (~13,400×g)离心30 sec，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。 6. 向吸附柱CB