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(1)显微化学反应 将生药的干粉、手切片或浸出液少量,置于载玻片上,滴加某些化学试剂使产生沉淀或结晶,在显微镜下观察反应结果;或产生特殊的颜色,从而进行鉴定。 ①将生药切片或粉末置载玻片上,滴加各种试液,加盖玻片,稍放置,在显微镜下观察产生的结晶、沉淀或颜色。 ② 取生药粗粉加适当溶剂浸提成分,将浸出液置载玻片上,滴加各种试液,加盖玻片,在显微镜下观察反应。 ③ 取生药切片或粉末,滴加各种试液,直接观察呈现的颜色。 ④ 显微化学定位试验:利用显微和化学方法,确定生药有效成分在生药组织构造中的部位。 五、生药的鉴定 (2)测物理常数 物理常数包括相对密度、旋光度、折光率、凝点、熔点等。对于油脂类、挥发油及树脂类药材的真实性和纯度的鉴别具有特别重要的意义。 相对密度——区别或检查生药的纯杂程度 比旋度(或旋光度)——区别或检查某些生药的纯杂程度,亦可用以测定含量 折光率——区别不同的油类或检查纯杂程度 凝点——区别或检查生药的纯杂程度,亦可用以测定含量 熔点——区别或检查生药的纯杂程度 五、生药的鉴定 (3)微量升华法 利用生药中所含的某些化学成分,在一定温度下能升华的性质,获得升华物,在显微镜下观察其形状、颜色以及化学反应作为鉴别特征。 方法:取金属片,安放在有圆孔(直径约2cm)的石棉板上,金属片上放一小金属圈(高度约0.8cm),对准石棉板上的圆孔,圈内加入生药粉末一薄层,圈上放一载玻片。在石棉板下圆孔处用酒精灯徐徐加热(火焰距板约4cm)数分钟,至粉末开始变焦,并有气化物发生,去火待冷,则有结晶状升华物凝集于玻片上。将玻片取下反转,在显微镜下观察结晶形状,并可加化学试剂观察其反应。必要时可用显微熔点测定器测定结晶的熔点。 五、生药的鉴定 (4)荧光分析 生物中的某些化学成分,接受自然光或紫外光照射时,能发生荧光,其特性和强度可以进行定性或定量分析。紫外光是荧光分析中常用的光源。 通常可直接取生药饮片、粉末或其浸出液,置暗处,用荧光仪照射进行观察。 有些生药本身不产生荧光,但以酸或碱处理,或经其它化学方法处理后,可使某些成分在紫外光下变成可见色彩。 有些生药表面附有地衣或真菌,也可能有荧光出现。因此荧光分析还可用于检查生药的变质情况。 五、生药的鉴定 此外,可利用荧光显微镜观察生药的荧光,并观察化学成分存在的部位。例如国产沉香与进口沉香的显微特征比较近似,但在荧光显微镜下观察:国产沉香粉末的部分颗粒显海蓝色,部分显灰绿色荧光;进口沉香粉末的部分颗粒显竹篁绿色,部分显枯绿色,部分显枯绿色荧光。苍术粉末中少数颗粒显天蓝色荧光;白术粉末显芒果黄色,少数颗粒显初熟杏黄色荧光。又如黄连含小檗碱,特别在木质部能显出强烈的金黄色荧光。 五、生药的鉴定 (5)分光光度法 通过测定被测物质在某些特定波长处或一定波长范围内光的吸光度,对该物质进行定性和定量分析的方法。 1)紫外分光光度法 一般用200~400nm的紫外光区,所用仪器为紫外分光光度计。 2)比色法 在可见光区(400~850nm),有些物质对光有吸收,有些物质本身并没有吸收,但在一定条件下加入显色试剂或经过处理使其显色后,可用此法测定。由于显色时影响呈色深浅的因素较多,测定时需用标准品或对照品同时操作。常使用的仪器为可见分光光度计或比色计。比色法多用于生药的定量分析及理物常数的测定。 五、生药的鉴定 3)红外分光光度法 一般用2.5~15mm红外区吸收光谱进行物质的定性、定量分析的方法。所用仪器为红外分光光度计。 红外光区的灵敏度和精密度较低,一般需数百mg的供试品进行测定。红外光谱(或称振转光谱)的特征性很强,特别是在7~15mm一段称为“指纹区”,吸收峰很多,而且尖锐,故主要用于物质的鉴别和分析结构。本法在牛黄、血竭、熊胆等的鉴别上,效果良好。 4)原子吸收分光光度法 本法是基于从光源辐射出的待测元素特征光波通过样品蒸气时,被蒸气中该待测元素的基态原子所吸收,测定辐射光强度减弱的程度,以求出供试品中待测元素含量的一种方法。所用仪器为原子吸收分光光度计。近年来用以测定生药中的微量金属元素的含量。 五、生药的鉴定 (6)色谱法(层析法) 1)根据色谱分离原理分类 ① 吸附色谱 ② 分配色谱 ③ 离子交换色谱 ④ 排阻色谱 五、生药的鉴定 2)根据色谱分离方法分类 ① 纸色谱法:以纸为载体,纸上所含水分或其他物质为固定相,用流动相进行展开的分配色谱。 样品经展开后,可用比移值(Rf)表示其各组分的位置。
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