化学反应法在活性氧测定中的应用及研究进展.pdfVIP

动物营养学报２０１３，２５（９）：１９４６１９５３ ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｎｉｍａｌＮｕｔｒｉｔｉｏｎ 　 ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００６２６７ｘ．２０１３．０９．００６ 化学反应法在活性氧测定中的应用及研究进展 邹　轶　彭　健 （华中农业大学动物科技学院，武汉 ４３００７０） 摘　要：活性氧由于在人的衰老和疾病中扮演了重要的角色，在现代医学和分子生物学领域越 来越受到人们的关注。体内活性氧水平作为机体遭受氧化损伤的重要指标，是区分生理和病理 状态的关键问题。但活性氧由于反应活性高和半衰期短的特点，在体内和体外的准确测定仍然 是一项难题。本文从活性氧化学反应法的测定原理和研究进展２个方面对分光光度法、化学发 光法、荧光光度法和电子自旋共振法等４个化学反应方法进行综述，比较这几种方法在实际应 用中的不同。 关键词：活性氧；分光光度法；化学发光法；荧光光度法；电子自旋共振法 中图分类号：Ｏ６５３　　　　文献标识码：Ａ　　　　文章编号：１００６２６７Ｘ（２０１３）０９１９４６０８ 　　正常的生理环境下，由于线粒体内氧化还原 关注。对于直接影响机体的ＲＯＳ，由于ＲＯＳ具有 链的作用，占体内总耗氧量２％的氧气转化成超氧 寿命短、反应活性高（表１）的特点，对于ＲＯＳ的准 － ［５－６］ 化阴离子 自由基（Ｏ ·）和一氧化氮 自由基 确测定仍然很困难 。因此，简单、重复性好、 ２ （ＮＯ·）等 活 性 氧 （ｒｅａｃｔｉｖｅｏｘｙｇｅｎｓｐｅｃｉｅｓ， 敏感且经济有效的ＲＯＳ测定方法在现代自由基分 ［１］ ＲＯＳ） ，由于体内抗氧化系统的作用，机体产生 子生物学中具有重要的意义。根据ＲＯＳ的理化特 的ＲＯＳ可被及时地清除。ＲＯＳ在体内维持生成 性，目前用于ＲＯＳ测定的主要方法有化学反应法、 和降解的动态平衡，从而保证机体的正常生理功 捕捉法、酶联免疫吸附测定（ＥＬＩＳＡ）法、高效液相 能［２］。当机体遭受感染、应激、过度的运动、有害 色谱（ＨＰＬＣ）法、气相色谱 －质谱联用（ＧＣＭＳ） － 的环境污染物、紫外光照等时，Ｏ ·、ＮＯ·、羟自 法、免疫印迹法、电洗脱法、等电聚焦法、伏安法 ２ 由基（·ＯＨ）、烷氧自由基（ＲＯ·）、氢过氧化物自 等［７－９］。其中，化学反应法由于其具有灵敏度高、 １ 由基（ＲＯＯＨ·）、单态氧（Ｏ）、碳酸盐负离子自 廉价和操作简便的特点，越来越广泛的被用于生 ２ － 物反应中 ＲＯＳ的测定。化学反应法是指由于 由基（ＣＯ ·）和过氧化氢（ＨＯ）等ＲＯＳ在体内 ３ ２ ２ ［３］ ＲＯＳ具有较高的反应活性，能够与许多不同的化 所占比例大幅提升 。当ＲＯＳ在体内生成过多或 清除过程受阻时，其数量快速增加，形成累积时高 合物发生化学反应，产生各种不同的反应生成物。 氧化活性的ＲＯＳ会对体内生物大分子，如 ＤＮＡ、 根据这些反应生成物或反应物的变化程度，通过 碳水化合物、蛋白质和脂类发生氧化反应，对机体 不同的分析仪器进行检测，就可以对 ＲＯＳ进行定 ［１］ ［１０］ 造成氧化损伤 。由于ＲＯＳ对机体的氧化损伤在 量或者定性分析 。目前主要的化学反应法有分