溶血磷脂酸通过RhoA-YAP通路调控脂肪干细胞增殖的研究.pdf

骨科2016年11月第7卷第6期 Orthopaedics,November2016,Vol.7,No.6 ·429· ·实验研究论著· 溶血磷脂酸通过RhoA⁃YAP通路调控 脂肪干细胞增殖的研究 叶亚平 李觅 吴颖星 黄俊明 印卫锋 郭风劲 【摘要】 目的 探讨溶血磷脂酸（lysophosphatidicacid,LPA）调控脂肪干细胞（adipose⁃derivedstem cells,ASCs）增殖的作用及其分子机制。方法 分离SD大鼠ASCs，利用LPA对其进行干预，干预时间为 1h，采用WesternBlot检测YES相关蛋白（yesassociatedprotein,YAP）、结缔组织生长因子（connective tissuegrowthfactor,CTGF）蛋白表达水平。利用免疫荧光检测YAP亚细胞定位，逆转录聚合酶链反应 （reversetranscriptionpolymerasechainreaction,RT⁃PCR）检测CTGF和Ankrd1的mRNA表达水平。慢病 毒转染ASCs，WesternBlot检测不同分组YAP蛋白表达。进一步利用流式细胞术和CCK⁃8法检测不同 分组中ASCs增殖情况。最后采用RhoA抑制剂C3干预，免疫荧光检测不同分组中YAP亚细胞定位， WesternBlot检测YAP、CTGF和GTP⁃RhoA的表达情况。结果 LPA能显著促进YAP的表达和在细胞核 内的聚集，同时LPA也能够促进YAP靶基因CTGF在蛋白水平的表达。LPA能上调YAP靶基因CTGF和 锚蛋白重复域1（ankyrinrepeatingdomain 1,Ankrd1）的mRNA表达水平。慢病毒转染敲除YAP表达后， LPA对YAP的上调作用被明显抑制。细胞周期流式细胞术和CCK⁃8检测结果显示LPA可显著促进 ASCs的增殖，但在shYAP慢病毒转染特异性敲除YAP后，LPA对ASCs的促增殖能力被明显削弱。RhoA 抑制剂C3处理后，LPA对YAP细胞核聚集的促进作用被削弱，同时LPA对YAP、CTGF和GTP⁃RhoA表达 的促进作用也得到了明显抑制。结论 LPA能够通过RhoA⁃YAP通路调控ASCs的增殖。 【关键词】 溶血磷脂酸；脂肪干细胞；RhoA⁃YAP通路；细胞增殖 Lysophosphatidicacidregulatestheproliferationofadipose⁃derivedstemcellsviatheRhoA/YAP signalingpathway. YEYaping,LIMi,WUYingxing,HUANGJunming,YINWeifeng,GUOFengjin.Depart⁃ mentofOrthopaedics,TongjiHospital,TongjiMedicalCollege,HuazhongUniversityofScienceandTechnology, Wuhan430030,China Correspondingauthor:GUOFengjin,E⁃mail:fjguo@ 【Abstract】 Objective Tostudytheroleandmolecularmechanismoflysophosphatidicacid(LPA)in regulatingadipose⁃derivedstemcells(ASCs)proliferation. Methods ASCswereisolatedfromSDratsand treatedwithLPAfor 1h.WesternblottingwasappliedtodetecttheexpressionofYAPandCTGFproteins. ImmunofluorescencestainingwasperformedtodetectYAPsubcellularlocalization.RT⁃PCRwasusedtodetect theexpressionsofYAPtargetgenesCTGFandAnkrd1.WesternblottingwasdonetodetectYAPprotein expressionafterlentivirustransfection.F