《质粒大量提取及纯化》-毕业论文（设计）.docVIP

扬州大学本科生毕业论文（设计） PAGE PAGE 7 扬州大学 本科生毕业论文 论文题目： 　　 质粒大量提取及纯化 　　　 学生姓名： 　 所在学院： 动物科学学院 专业班级： 　 动科 指导老师： 　 教授 完成日期： 年6月 质粒大量提取及纯化 动物科学 摘要：为了探讨氯霉素对重组质粒DNA提取产量的影响，本试验在含重组质粒pT2/HB-CMV-EGFP的大肠杆菌DH5α培养到对数生长期时添加氯霉素继续培养12小时，收集细菌用碱裂解法粗提质粒DNA，并用紫外分光光度计测定其浓度和纯度。结果表明，氯霉素可有效的促进松弛型重组质粒DNA拷贝数的增加，从而达到提高质粒DNA产量的目的。为了优化质粒DNA纯化过程中溶液A的用量，本试验将同一份粗提质粒DNA平分成三组，分别加入不同量的溶液A。纯化后测定各组DNA浓度和纯度，结果表明，溶液A用量（ml）:质粒DNA量(mg)为1:2时，纯化效果最好。 关键词：质粒提取；氯霉素；纯化 Extraction?and purification of Large-scale plasmid DNA ZHANG Chen Abstract: To study the effect of chloramphenicol on plasmid DNA preparation, in this experiment the chloramphenicol was added to the recombinant E. coli culture at the logarithmic growth phase，and then the plasmid DNA was extracted by using the traditional alkaline method. Concentration and purity of the plasmid DNA was detected and the results showed that chloramphenicol could effectively increase the copy number of relaxed plasmid and increase the output of the plasmid DNA. In order to optimize the amount of solution A which was used to purify plasmid DNA, different amount of solution A was added to the coarse extraction of plasmid. Then the concentration and purity of the puritied plasmid DNA was determined.The results showed that the purification effect was the best when the proportion of solution A(ml) and coarse plasmid DNA(mg) was by 1-2. Key Words:extract of plasmid DNA;chloramphenicol;purification; 质粒是存在于细菌染色体外的一个或多个能独立复制并稳定遗传的小型环状双链DNA分子,其分子量一般在0.2～10kD范围内[1]。由于这些质粒独立于细菌染色体之外进行复制，分子量小,便于分离和提取,可以携带目的基因进入细菌、动物细胞或植物体内进行扩增与表达，具有稳定可靠和操作简便等优点，因此成为分子克隆的常用工具[2]。质粒DNA的提取是分子生物学实验室最常规的操作之一，其提取效率及质量对后续实验步骤(如酶切、连接、转化大肠杆菌与PCR扩增等)的成功与否有着直接的关系[3]。因而高效快速地从细菌细胞中分离纯化质粒具有重要意义[4]。大肠杆菌因其易操作，发酵周期短，备受分子生物学工作者的青睐。因此，大肠杆菌质粒DNA的提取成为分子生物学实验中最基础和最重要的工作。 质粒DNA提取的方法