生长与环境条件.pptxVIP

第七章 生长与环境条件;微生物的分离和纯培养 无菌技术 用固体培养基分离纯培养 用液体培养基分离纯培养 单细胞(单孢子)分离 选择培养分离 二元培养物 微生物的保藏技术 ;一、无菌技术 　 在分离、转接及培养纯培养物时防止其被其他微生物污染的技术被称为无菌技术( aseptic technique). 它是保证微生物学研究正常进行的关键。;微生物培养的常用器具及其灭菌 试管、玻璃烧瓶、平皿(culture dish，petri dish)　灭菌，不含任何生物。 培养基在器皿中灭菌，也可单独灭菌后加入无菌的器具中。 高压蒸汽灭菌 高温干热灭菌;防止杂菌污染　　棉花塞，金属、塑料及硅胶帽，空气通过，微生物不能通过。 平皿是由正反两平面板互扣而成，这种器具是专为防止空气中微生物的污染而设计的。;接种操作技术 用接种环或接种针分离微生物，或在无菌条件下把微生物由一个培养器皿转接到另一个培养容器进行培养。 微生物实验的所有操作均应在无菌条件下进行。;二、用固体培养基分离纯培养 菌落或菌苔 大多数细菌、酵母菌，以及许多真菌和单细胞藻类能在固体培养基上形成孤立的菌落， 平板分离法利用固体培养基让孤立的活微生物体生长、繁殖形成菌落，形成便于移植的菌落，进而得到纯培养。;所谓平板，即培养平板(culture plate)的简称，它是指熔化的固体培养基倒入无菌平皿，冷却凝固后，盛有固体培养基的平皿。 Koch建立的平板分离微生物纯培养的技术简便易行，100多年来一直是各种菌种分离的最常用手段。;稀释倒平板法(pour plate method) 涂布平板法(spread plate method) 平板划线分离法(streak plate method) 稀释摇管法(dilution shake culture method) ;稀释倒平板法取样---系列稀释---混菌---培养---单菌落(可能是由一个细菌细胞繁殖形成的)---挑取单菌落，或重复操作---纯培养。 涂布平板法 无菌平皿---无菌平板---稀释样品悬液---涂布---培养---单菌落 ;平板划线分离法 待分离材料---平行划线、扇形划线或其他形式的连续划线(微生物细胞数量将随着划线次数的增加而减少，并逐步分散开来)---培养---单菌落。 ;稀释摇管法 对氧气更为敏感的厌氧性微生物的分??则可采用稀释摇管培养法进行。 将一系列盛无菌琼脂培养基的试管加热使琼脂熔化后，冷却并保持在50℃左右，用这些试管进行梯度稀释待分离材料，试管均匀，冷凝，倾注一层灭菌液体石蜡和固体石蜡的混合物，将培养基和空气隔开。培养后，菌落形成在琼脂柱的中间，挑取和移植单菌落。;三、用液体培养基分离纯培养 　接种物在液体培养基中依序稀释，以达高度稀释的效果，使一支试管中分配不到一个微生物。如果稀释后的多数试管微生物不生长，则有微生物生长的试管得到的培养物可能就是纯培养物。;四、单细胞(单孢子)分离 采取显微分离法从混杂群体中直接分离单个细胞或单个个体进行培养以获得纯培养，称为单细胞(单孢子)分离法。 难度 用途;五、选择培养分离 通过选择培养进行微生物纯培养分离的技术称为选择培养分离。 可利用选择培养基进行直接分离或富集培养。;利用选择培养基进行直接分离主要根据待分离微生物的特点选择不同的培养条件 ，得到纯培养物。 富集（选择）培养主要是指利用不同微生物间生命活动特点的不同，制定特定的环境条件，使仅适应于该条件的微生物旺盛生长，从而使其在群落中的数量大大增加，人们能够更容易地从自然界中分离到所需的特定微生物。 富集（选择）条件 温度、pH、紫外线、高压、光照、氧气、营养 ;六、二元培养物 只有一种微生物的培养物称为纯培养物，含有二种以上微生物的培养物称为混合培养物，而如果培养物中只含有二种微生物，而且是有意识地保持二者之间的特定关系的培养物称为二元培养物。 例如二元培养物是保存病毒的最有效途径。;七、微生物的保藏技术 传代培养保藏 冷冻保藏 干燥保藏法;菌种保藏就是根据菌种特性及保藏目的的不同，给微生物菌株以特定的条件，使其存活而得以延续。 保藏技术的要求(不死亡，不污染，不变异) 菌种或培养物保藏的重要性;菌种保藏机构：中国微生物菌种保藏委员会(CCCCM)，中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，美国典型菌种保藏中心(ATCC)，世界菌种保藏联合会(WFGC) 。;传代培养保藏 常用的有琼脂斜面、半固体琼脂柱及液体培养等。 选择使用适宜的培养基，并在规定的时间内进行移种。 传代培养十分繁琐，容易污染，特别是会由于菌株的自发突变而导致菌种衰退，使菌株的形态、生理特性、代谢物的产量等发生变化 。;冷冻保藏 使微生物处于冷冻状态，代谢作