食品中微生物数量的检测技术与指示菌类精编版.pptVIP

典型大肠杆菌为粪便近期污染的标志 其它菌属则为粪便陈旧污染的标志 ETEC EIEC 阴沟肠杆菌 EHEC 产气克雷白氏菌 大肠埃希氏菌 柠檬酸杆菌 O157：H7 2、大肠菌群的食品卫生学意义 作为食品被粪便污染的指示菌 MPN值愈低则说明食品受粪便污染程度及对人体健康危害程度愈低 作为食品被肠道致病菌污染的指示菌 大肠菌群数量越多则肠道致病菌存在的可能性就越高，但两者之间并不总是呈平行关系 要求食品中大肠菌群完全不存在是不可能的，重要的是其污染程度即菌量 3、大肠菌群检测方法与检测结果 检测方法： MPN计数法： LST发酵试验 BGLB发酵证实试验 平板计数法： VRBA平板计数 BGLB发酵证实试验 见GB/T4789.3-2010 检测结果：用每1mL(g)样品中大肠菌群最近似数来表 示，简称大肠菌群MPN。 LST发酵试验 BGLB VRBA平板 第三节 其他菌类数量的检测方法 一、嗜冷菌数量测定 采用SPC法，在7℃培养10d观察肉眼可见菌 适用于检验鱼类、贝类等冷冻食品和低温冷藏食品中的嗜冷菌 二、耐热菌与芽孢数量的测定 耐热菌：将少量样品72℃处理15s后，与45℃左右的已溶化的培养基混合，于30~32℃培养48h计数。 芽孢数量：将样品分成几份，分别80℃处理10min ，85℃处理10~15min后，立即冷却至10℃以下，与45℃左右的已溶化的培养基混合。 嗜温菌芽孢30℃培养72h计数，嗜热菌芽孢55℃培养48h计数。 三、酵母菌与霉菌数量的测定 采用SPC方法，以PDA或孟加拉红培养基于28℃培养5d后观察计数。 选取菌落数在10~150CFU之间的平皿计数，其它计数原则、报告方式与菌落总数相似。 3）稀释 4）倾注平板 稀释液移入平皿后，将46℃ 左右的平板计数琼脂培养基注入平皿约15ml，转动平皿。 5）倒置培养 琼脂凝固后，翻转平板 细菌：一般食品 36±1℃ 48h 水产品 30±1℃ 72h 霉菌： 28±1℃ 5d （四）菌落计数法 肉眼观察（直接、放大镜） 利用自动影像分析菌落计数仪 10-1 均数 10-2 均数 描 述 最终结果 255 36 均在30~300间则按计数公式 2.6×103 多不可计 345 各平板均300，取稀释度最高者报告，余计为多不可数 3.5×104 12 2 均小于30则取稀释度最低者报告 1.2×102 330 29 所有平板均不在30~300CFU且一部分30 或300者以最接近30或300者报告 2.9×103 0 0 所有平板均无菌落则记为 1乘以最低稀释倍数报告 1×10 即 10 结果表述 （五）菌落计数的报告 报告单位：cfu/g(mL) 1、平板菌落数的选择： 30~300cfu 2、菌落数的计算： 3、菌落数的报告： 低于30时 按实数报告 100cfu以内时 按四舍五入修约，采用两位有效 数字报告 ≥100时 第三位数四舍五入修约，取前两 位数字 例：205043→210000 or 2.1×105 先倒平板，待其凝固后，吸取0.1ml稀释液于平板表面上，用无菌玻璃刮铲在整个平板上均匀涂布，培养观察。 涂布平板法 涂布法的优缺点 可检测到热敏性菌株 菌落形态比较明显 更适合于严格的好氧菌 没有倾注法简便，易造成机械损伤 三、最近似数测定法（most probable number MPN） 对未知样品做连续的10倍稀释，选择3个连续的10倍稀释液，每种稀释液接种3管（5管）装有培养基的试管中培养，根据实验结果查MPN检索表，得到样品中微生物的数量。 根据经确证后的对应浓度阳性管数查MPN表 MPN：最可能数，基于泊松分布的一种间接计数方法 阳性管数 MPN 95%可信限 0.10 0.01 0.001 下限 上限 0 0 0 3.0 - 9.5 0 0 1 3.0 0.15 9.6 1 0 0 3.6 0.17 18 3 3 3 1100 420 - MPN的优点： 操作简便 与SPC相比，相似率较高 采用选择性培养基可检测特殊微生物菌群 特别适用于检测食品内含菌量较少的样品 MPN的缺点： 需要大量的玻璃器皿 不能观察微生物菌落形态 要注意严格的无菌操作 食品冷饮大肠菌群检验