嗜热枯草芽孢杆菌普鲁兰酶基因的表达与重组酶的性质.PDFVIP

微生物学通报 DEC 20, 2011, 38(12): 1755−1761 Microbiology China © 2011 by Institute of Microbiology, CAS tongbao@ 研究报告 嗜热枯草芽孢杆菌普鲁兰酶基因的表达与 重组酶的性质 1 1 2 1 1* 韩鹏 周鹏 闫巧娟 杨绍青 江正强 (1. 中国农业大学 食品科学与营养工程学院 北京 100083) (2. 中国农业大学 工学院 北京 100083) 摘 要: 克隆嗜热枯草芽孢杆菌WY-34 普鲁兰酶基因并在大肠杆菌中进行表达, 对重组酶进行纯 化和酶学性质研究, 根据枯草芽孢杆菌的普鲁兰酶蛋白序列, 设计PCR 引物对WY-34 的普鲁兰酶 基因进行克隆及异源表达。对表达蛋白的最适 pH 、pH 稳定性及最适温度、温度稳定性等特性进 行研究, 并测定重组普鲁兰酶的底物特异性。将普鲁兰酶基因pluA 克隆及分析序列后, 发现基因 长度为2.2 kb, 编码718 个氨基酸, 在大肠杆菌中异源表达。通过Ni-IDA 亲和层析一步纯化得到 比活力为93.2 U/mg 的纯酶, SDS和凝胶层析测定的分子量分别为76.2 kD 和74.3 kD 。酶学 性质研究表明, 该酶的最适温度为40 °C, 在温度不高于45 °C 条件下稳定; 最适pH 为6.0, 同一 温度下pH 6.0−9.0 范围内处理30 min 可以保持80%以上的酶活力, 此酶对普鲁兰糖有很强的底物 特异性。此重组普鲁兰酶的酶学性质表明此酶具有一定的工业化应用价值。 关键词: 枯草芽孢杆菌, 普鲁兰酶, 酶学性质, 基因表达 Expression of a pullulanase gene from the thermophilic Bacillus subtilis and characterization of the recombinant enzyme HAN Peng1 ZHOU Peng1 YAN Qiao-Juan2 YANG Shao-Qing1 JIANG Zheng-Qiang1* (1. College of Food Science and Nutritional Engineering, China Agricultural University, Beijing 100083, China) (2. College of Engineering, China Agricultural University, Beijing 100083, China) Abstract: The pullulanase gene of thermophilic Bacillus subtilis WY-34 was cloned in E . coli to char- acterize the recombinant pullulanase. The plu