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叶绿素含量的测定 一、原理 根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收，利用分光光度计在某一特定波长测定其吸光度， 即可用公式计算出提取液中各色素的含量。 根据朗伯 — 比尔定律，某有色溶液的吸光度 A 与其中溶质浓度 C 和液层厚度 L 成正比，即 A ＝ αCL 式中： α比例常数。当溶液浓度以百分浓度为单位，液层厚度为 1cm 时， α为该物质的吸光 系数。各种有色物质溶液在不同波长下的吸光系数可通过测定已知浓度的纯物质在不同波长 下的吸光度而求得。 如果溶液中有数种吸光物质， 则此混合液在某一波长下的总吸光度等于各组分在相应波长下 吸光度的总和。这就是吸光度的加和性。今欲测定叶绿体色素混合提取液中叶绿素 a、b 和 类胡萝卜素的含量，只需测定该提取液在三个特定波长下的吸光度 A ，并根据叶绿素 a、b 及类胡萝卜素在该波长下的吸光系数即可求出其浓度。在测定叶绿素 a、b 时为了排除类胡 萝卜素的干扰，所用单色光的波长选择叶绿素在红光区的最大吸收峰。 已知叶绿素 a、叶绿素 b 的 80% 丙酮溶液在红外区的最大吸收峰分别位于 663 、645nm 处。 已知在波长 663nm 下叶绿素 a、叶绿素 b 在该溶液中的吸光系数的分别为 82.04 和 9.27；在 波长 645nm 处的吸光系数分别为 16.75 和 45.60 。根据加和性原则列出以下关系式： A663=82.04Ca+9.27Cb （1） A645=16.76Ca+45.60Cb （2 ） 式（ 1） （2）A663 nm 和 A645nm 为叶绿素溶液在 663nm 和 645nm 处的吸光度， Ca Cb 分别为叶绿素 a、叶绿素 b 的浓度，以 mg/L 为单位。 解方程（ 1） （2 ）组得 Ca=12.72 A663 — 2.59 A645 (3) C =22.88 A — 4.67 A (4) b 645 663 将 Ca+Cb 相加即得叶绿素总量 CT ＝ C 十 C ＝20.29A CT a b 645 — 8.05 A 663 (5) 从公式（ 3）、（4 ）、（5）可以看出， ，就可计算出提取液中的叶绿素 a、 b 浓度另外，由于叶 绿素 a 叶绿素 b 在 652nm 的吸收峰相交， 两者有相同的吸光系数 （均为30.5 ），也可以在此 波长下测定一次吸光度（ A652 ）而求出叶绿素 a、叶绿素 b 总量 所测定材料的单位面积或单位重量的叶绿素含量可按下式进行计算： A 1000 652 CT ＝ (6) 34 .5 有 叶 绿 素 存 在 的 条件 下 ， 用 分 光 光 度 法 可 同 时 测 出 溶 液中 类 胡 萝 卜素 的 含 量 。 Licht-enthaler 等对 Arnon 进行了修正， 提出了 80%丙酮提取液中 3 种色素含量的计算公式： Ca＝12.21A663 — 2.59 A646 (7) Cb =2