侧钩木霉的分离鉴定及产孢条件优化.pdfVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１４，３４（２）：８４９２ ＤＯＩ：１０．１３５２３／ｊ．ｃｂ 侧钩木霉的分离、鉴定及产孢条件优化 高雪丽　吴坚平　徐　刚　杨立荣 （浙江大学化学工程与生物工程学系　杭州　３１００２７） 摘要　从堆肥中分离得到一株具有较强拮抗植物病原菌活性的木霉菌，经过分子生物学方法鉴 定为侧钩木霉（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｇｈａｎｅｎｓｅ）。以该菌为出发菌株，对其固态发酵培养基进行优化，以期 提高孢子产量。通过单因素筛选、ＰｌａｃｋｅｔｔＢｕｒｍａｎ实验、最陡爬坡实验和响应面分析确定影响孢 子产量的最重要的三因素为蔗糖、玉米浆、硫酸镁，其最佳浓度分别为０．５６％、０．５６％和２．５９％， 最佳初始含水量为３５％，最佳初始ｐＨ值为９。优化后的固态发酵培养基上，该菌孢子产量可达 ９ １．１６×１０ＣＦＵ／ｇＩＤＳ，约是优化前的１７倍。 关键词　侧钩木霉　分离　鉴定　固态发酵　响应面法 中图分类号　Ｑ８１５　Ｑ８１９ 　　木霉菌（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｓｐｐ．）是极具生防潜力的真 物病原菌的对峙培养确定其具有较强的拮抗活性，利 菌，能通过竞争、重寄生、产生抗生素、诱导抗性、溶菌、 用分子生物学方法鉴定其为侧钩木霉。进而采用单因 植物促生等多种机制实现对植物病原真菌的拮抗作 素实验筛选固态发酵培养基质和营养物种类，利用 ［１５］ ＰｌａｃｋｅｔｔＢｕｒｍａｎ设计法筛选出显著影响因子，通过响应 用，因而被广泛应用于农业生产 。目前，研究较多 ［６８］ 面中心组合设计法（ＣｅｎｔｒａｌＣｏｍｐｏｓｉｔｅＤｅｓｉｇｎ）研究显著 的主要有哈茨木霉（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｈａｒｚｉａｎｕｍ） 、绿色木 ［９１１］ 影响因子的交互作用并确定各因子的最佳组合，确定 霉 （Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｖｉｒｉｄｅ） 、康 氏木霉 （Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ［１２１４］ 了最优的固态发酵培养基成分配比、含水量及 ｐＨ值， ｋｏｎｉｎｇｉｉ） 、 拟 康 氏 木 霉 （Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ［１５１７］ 提高了孢子的产量，为其规模化应用奠定了基础。 ｐｅｓｕｄｏｋｏｎｉｎｇｉｉ） 、 长 枝 木 霉 （Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ［１８１９］ ｌｏｎｇｉｂｒａｃｈｉａｔｕｍ） 、多 孢 木 霉 （Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ １　材料与方法 ［２０２１］ ｐｏｌｙｓｐｏｒｕｍ） 和 侧 钩 木 霉 （Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ［２２２３］ １．１　材　料 ｇｈａｎｅｎｓｅ） 。其中，侧钩木霉能有效控制由腐病菌 ［２４］ 　　本实验所用堆肥来自于菲律宾ＢｉｏＳｐａｒｋ公司生产 （Ｐｙｔｈｉｕｍａｒｒｈｅｎｏｍａｎｅｓ）引起的水稻枯萎病 ，已经成 的ＢｉｏＳｐａｒｋＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ肥料。该堆肥中含有三种木霉 为农业生防制剂开发的重要对象。 菌孢子，分别是经紫外线照射的哈茨木霉 （ＵＶ 　　孢子制剂是木霉菌农业生产应用的主要形 ［２５２６］ Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｈａｒｚｉａｎｕｍ），拟康 氏木霉 （Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ 式 。如何获得大量的木霉菌孢子，是制备木霉菌 ｐｅｓｕｄ