产菊酯降解酶重组菌的高密度发酵工艺优化.pdfVIP

第５７卷　第 ３期 中山大学学报 （自然科学版） Ｖｏｌ５７　Ｎｏ３ 　 ２０１８年　５月 ＡＣＴＡ　ＳＣＩＥＮＴＩＡＲＵＭ　ＮＡＴＵＲＡＬＩＵＭ　ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＡＴＩＳ　ＳＵＮＹＡＴＳＥＮＩ Ｍａｙ　２０１８　 ＤＯＩ：１０１３４７１／ｊｃｎｋｉａｃｔａｓｎｕｓ２０１８０３０１５ 产菊酯降解酶重组菌的高密度发酵工艺优化 １，２ ２ １ １ ２ １，２ 范新炯 ，莫忠兴 ，张曼曼 ，裴生斌 ，刘玉焕 ，刘孝龙 （１安徽医科大学基础医学院，安徽 合肥２３００３２； ２中山大学生命科学学院，广东广州５１０２７５） 摘　要：为提高菊酯降解酶的产量，利用单因素和正交实验法对重组菌ＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉＢＬ２１（ＤＥ３）／ｐＥＴ－２８ａ －１ （＋）－ｓｙｓ４１０的发酵培养基组成和发酵条件进行优化。结果显示最优培养基含有２００ｇ·Ｌ 甘油、２００ｇ· －１ －１ －１ －１ －１ Ｌ 酵母粉、８０ｇ·Ｌ 硫酸铵、１０００ｍｍｏｌ·Ｌ 磷酸盐、５０ｍｍｏｌ·Ｌ 硫酸镁，以及 １５ｍＬ·Ｌ 的微量元 素；发酵条件为装液量５０ｍＬ／２５０ｍＬ、初始培养基ｐＨ７０、接种量２％，接种培养８ｈ后乳糖诱导６ｈ。在７５Ｌ 发酵罐上，使用低浓度碳氮源进行培养，前期恒速补料，对数中后期进行乳糖诱导，后期恒溶氧补料，最终菌 －１ 体密度和酶活力分别为１４２６和３１０５１Ｕ·ｍＬ ，较摇瓶发酵分别提高１３７倍和３１９倍。发酵液经破碎和冷 －１ 冻干燥后酶活力达到１１９４２６９Ｕ·ｇ ，且该酶对菊酯的降解率高于９５％。 关键词：农药降解酶；高密度发酵；拟除虫菊酯；生物降解 中图分类号：Ｑ８１５　　文献标志码：Ａ　　文章编号：０５２９－６５７９（２０１８）０３－０１０８－１２ Ｅｎｈａｎｃｉｎｇｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆａｎｏｖｅｌｐｙｒｅｔｈｒｏｉｄｈｙｄｒｏｌｙｚｉｎｇ ｅｎｚｙｍｅｂｙｈｉｇｈｄｅｎｓｉｔｙｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｏｆＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ １，２ ２ １ １ ２ １，２ ＦＡＮＸｉｎｊｉｏｎｇ ，ＭＯＺｈｏｎｇｘｉｎ，ＺＨＡＮＧＭａｎｍａｎ，ＰＥＩｓｈｅｎｇｂｉｎ，ＬＩＵＹｕｈｕａｎ，ＬＩＵＸｉａｏｌｏｎｇ （１ＳｃｈｏｏｌｏｆＢａｓｉｃＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，ＡｎｈｕｉＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈｅｆｅｉ２３００３２，Ｃｈｉｎａ； ２ＳｃｈｏｏｌｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ，ＳｕｎＹａｔｓｅｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ５１０２７５，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｗｅｐｒｅｖｉｏｕｓｌｙｓｃｒｅｅｎｅｄａｎｄｏｂｔａｉｎｅｄａｎｏｖｅｌｐｙｒｅｔｈｒｏｉｄｈｙｄｒｏｌｙｚｉｎｇｇｅｎｅｓｙｓ４１０ｆｒｏｍＴｕｒｂａｎ Ｂａｓｉｎｍｅｔａｇｅｎｏｍｉｃｌｉｂｒａｒｙ，ｗｈｉｃｈｗａｓｅｘｐｒｅｓｓｅｄｉｎＥｃｏｌｉＢＬ２１（ＤＥ３）ｉｎｓｏｌｕｂｌｅｆｏｒｍ．Ｈｅｒｅ，ｔｏｅｎ ｈａｎｃｅｔｈｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎａ